Общие методы анализа (стр. 10 )

Во флюоресцентных исследованиях часто важно регулирование температуры и удаление кислорода, являющегося сильным тушителем флюоресценции. При одновременном определении испытуемого и стандартного образцов необходимость термостатирования и удаления кислорода, как правило, отпадает, для этого измерение надо проводить достаточно быстро, чтобы не произошло нагревания образца от источника облучения.

Спектр флюоресценции находится по сравнению со спектром поглощения в более длинноволновой области (на 50 - 100 нм) и дает широкие полосы излучения в пределах от 100 до 200 нм.

Характер спектра флюоресценции, а также цвет излучаемого света специфичны для флюоресцирующих веществ (флуорохромов), поэтому флюоресценция может быть применена как для качественного, так и для количественного анализа.

Для выполнения флуориметрического анализа используют спектрофлуориметры, принцип работы которых заключается в следующем: свет от ртутно - кварцевой лампы через первичный светофильтр и конденсор падает на кювету с раствором испытуемого вещества; последнее начинает флюоресцировать. Кванты возбужденного света проходят через вторичные светофильтры и падают на фотоэлемент, соединенный с чувствительным гальванометром, отмечающим количество поступающего на фотоэлемент света.

Для проведения количественного анализа в качестве раствора сравнения применяют раствор стандартного образца флюоресцирующего вещества известной концентрации. Расчет производят по формуле:

  (n1 - n2)c

  Х = -----------,

  n - n2

где n1-n2 - показания спектрофлуориметра для испытуемого раствора за вычетом поправки на контрольный опыт; n - n2 - то же для раствора стандартного образца за вычетом поправки на контрольный опыт; с - концентрация раствора стандартного образца в выбранных единицах измерения.

Расчет производят с помощью калибровочного графика или шкалы стандартных растворов.

  Так как  интенсивность  флюоресценции  пропорциональна

концентрации вещества обычно в очень  узкой  области,  соотношение

┌ Jх - J0 ┐

│---------│ (Jх,  J0,  Jс  -  соответственно  интенсивности

└ Jс - J0 ┘

флюоресценции испытуемого  раствора,  растворителя  и стандартного

раствора) должно быть не менее 0,40 и не более 2,50.

Относительная ошибка флуориметрического метода составляет не более 5%.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СТЕПЕНИ БЕЛИЗНЫ

ПОРОШКООБРАЗНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

В случае твердых субстанций оценка степени белизны (оттенка) может быть проведена инструментальным методом, исходя из спектральной характеристики света, отраженного от образца. В простейшем случае оценку степени белизны можно получить, исходя из коэффициентов отражения, измеренных при освещении образца белым светом (источник со спектральным распределением, соответствующим спектральному распределению источника типа А по ГОСТу 7721-76), а также белым светом, пропущенным через красный или синий фильтр с эффективными максимумами пропускания соответственно при 614 и 459 нм. Коэффициент отражения белого света (rб) при оценке степени белизны может быть заменен коэффициентом отражения света, пропущенного через зеленый светофильтр с максимумом пропускания при 522 нм.

Коэффициент отражения представляет собой отношение величины отраженного светового потока к величине падающего светового потока.

  Измерение коэффициентов  отражения  осуществляют  на  приборах

типа  лейкометра  или  спектрального  фотометра "Specol-10" (фирмы

"Carl  Zeiss  Jena",  ГДР).  Измеренные  относительно  эталона  с

коэффициентом отражения в видимой области спектра ~=0,85, значения

коэффициентов  отражения  образцов  лекарственного  вещества  (r)

позволяют определить наличие или отсутствие у  них  цветового  или

сероватого  оттенка  соответственно  по  величинам степени белизны

("альфа") и степени яркости  ("бета").  Величину  степени  белизны

"альфа"  определяют  для  лекарственных  веществ  с  желтоватым,

  r459

кремоватым или розоватым оттенками  как  отношение  ----,  а  для

  r614  r614

лекарственных веществ с голубоватым оттенком - как отношение ----.

  r459

Степень яркости "бета" характеризуют величиной  r522  или  rб.  (В

индексах  r  указана  длина  волны  максимума  пропускания

светофильтров).

Для белых и белых с сероватым оттенком лекарственных веществ величина "альфа" теоретически равна 1. Если "альфа" < 1, то лекарственное вещество имеет оттенок. Лекарственные вещества, для которых "бета" < 0,85 и "альфа" находится в интервале 0,95-1,00, имеют сероватый оттенок.

Уточненная оценка белизны лекарственных веществ с указанием интенсивности цветовых и сероватого оттенков может быть проведена с использованием абсолютных коэффициентов отражения (R), определяемых с помощью спектрофотометров отражения, снабженных интегрирующей сферой, например СФ-18 ("ЛОМО", СССР). Настройка прибора в этом случае осуществляется по эталону с коэффициентом отражения в видимой области ~= 1.

  При этом  интенсивность цветового  и  сероватого  оттенков

оценивают по величинам степени белизны (альфа') и степени  яркости

(бета') соответственно. Величину степени белизны альфа' определяют

для лекарственных веществ с  желтоватым,  кремоватым  и  розоватым

  R459

оттенками  как  отношение ------, а  для  лекарственных  веществ c

  R614

  R614

голубоватым  оттенком - как  отношение ----.  Степень  яркости

  R459

(бета') характеризуют  величиной  максимального  коэффициента

отражения образца лекарственного вещества в видимой области Rmax.

  Оценка интенсивности  цветового  и  сероватого  оттенков

проводится в соответствии с табл. 1 и 2.

Таблица 1

Оценка интенсивности цветового оттенка

по величине степени белизны альфа'

┌───┬────────────────┬───────────────────────────────────────────┐

│ N │Пределы значений│  Оценка интенсивности цветового оттенка  │

│п/п│  альфа'  │  │

├───┼────────────────┼───────────────────────────────────────────┤

│ 1 │  1,00 - 0,96  │  Отсутствует оттенок  │

│ 2 │  0,96 - 0,94  │  Едва заметный оттенок  │

│ 3 │  0,94 - 0,90  │  Слабый оттенок  │

│ 4 │  0,90 - 0,86  │  Отчетливый оттенок  │

└───┴────────────────┴───────────────────────────────────────────┘

Примечание. При величине (альфа') < 0,86 лекарственное вещество не следует рассматривать как имеющее белый цвет.

Значения степени белизны ("альфа" и альфа') и степени яркости ("бета" и бета') являются объективными характеристиками качества белых и белых с оттенками лекарственных веществ. Пределы их допустимых значений могут быть регламентированы в частных статьях.

Методика определения. Подготовка пробы. В зависимости от поставленной задачи определение степени белизны и степени яркости может производиться на образцах порошкообразных лекарственных веществ без предварительной обработки или после их измельчения в течение 2 мин на лабораторной электрической мельнице ЭМ-3А (ГОСТ 5.692-70). Масса пробы, необходимая для проведения измерений, составляет 2-3 г.

Таблица 2

Оценка интенсивности сероватого оттенка

по величине степени яркости бета'

┌───┬────────────────────┬───────────────────────────────────────┐

│ N │  Пределы значений  │  Оценка интенсивности  │

│п/п│  бета'  │  сероватого оттенка  │

├───┼────────────────────┼───────────────────────────────────────┤

│ 1 │  1,00 - 0,98  │  Отсутствие оттенка  │