Общие методы анализа (стр. 72 )

│Среднее│219,00│  │  │230,75│  │  │221,50│  │  │232,75│  │  │

└───────┴──────┴───┴──┴──────┴──────┴───────┴──────┴─────┴────┴──────┴──────┴──────┘

II.5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ АНТИБИОТИКОВ МЕТОДОМ

ДИФФУЗИИ В АГАР НА ЧАШКАХ ПЕТРИ

Описанная в предыдущем параграфе методика определения активности антибиотиков по схеме латинского квадрата предполагает использование лотков. Возможен и другой способ определения этой активности - по диффузии в агар на чашках Петри. Ниже описан трехдозный вариант этого метода <*>.

--------------------------------

<*> Этот раздел основан на разработке Всесоюзного НИИ антибиотиков и Государственного НИИ по стандартизации и контролю лекарственных средств Министерства здравоохранения СССР.

  Стандартный (S) и испытуемый (U) образцы растворяют из расчета

1 мг в 1 мл (основной раствор),  затем готовят по три концентрации

  S  S  S

рабочих  растворов  стандарта (D1,  D2,  D3) и испытуемого образца

  U  U  U

(D1, D2, D3),  относящиеся друг  к  другу  как  1:2:4.  Все  6

растворов  закапывают  на  одну  чашку  Петри,  причем

последовательность внесения  растворов  в  цилиндры  или  в  лунки

должна быть  случайной  (возможные  последовательности  внесения

растворов приведены в табл.  II.5.1). Число чашек n должно быть не

меньше 6.

  Для уменьшения  влияния  колебаний  во времени между внесением

различных  растворов  рекомендуется  после  внесения  растворов

выдерживать чашки в течение 1-2 ч при комнатной температуре. После

  S  U

измерения зон  угнетения  роста  результаты опыта у  ,  и  у

  i, j  i, j

(i =  1, 2, 3 -  номера  доз,  j = 1,  2,  ...,  n - номера чашек)

записывают в таблицу (как показано в  приведенном  ниже  численном

примере).  Там  же  записывают  получаемые  расчетом  следующие

вспомогательные величины:

  S  U

  Si = SUM у  и Ui = SUM у  (II.5.1)

  j  i, j  j  i, j

- суммы по чашкам для каждой дозы стандарта и испытуемого образца;

  S  U

  Tj = SUM у  + SUM у  ,  (II.5.2)

  i  i, j  i  i, j

- суммы по всем дозам для каждой чашки;

у = SUM у  = (S1 + S2 + S3) +(U1 + U2 + U3) = SUM Tj  (II.5.3)

  i, j  i, j  j

- суммы всех диаметров зон задержки роста по всем дозам и чашкам.

Далее вычисляют:

  S = S1 + S2 + S3  и  U = U1 + U2 + U3  (II.5.4)

- суммы всех диаметров зон задержки роста отдельно для стандарта и

для испытуемого образца;

  L  = S3 - S1  и L  = U3 - U1  (II.5.5)

  S  U

- "линейные контрасты" для стандарта и для испытуемого образца;

  Q  = S1 - 2S2 + S3  и  Q  = U1 - 2U2 + U3  (II.5.6)

  S  U

"квадратичные контрасты" для стандарта и для испытуемого образца.

Для проверки законности дальнейших расчетов следует провести дисперсионный анализ результатов опыта в соответствии с табл. II.5.2, а именно должно получиться F < F(95%; f, fост) для строк 2, 3, 4 и F > F (95%) для строки 1.

Выполнение первого условия одновременно означает, что вариации в этих строках 2, 3, 4 должны рассматриваться как случайные, и поэтому их следует включить в остаточную вариацию, произведя также перерасчет значимости линейной регрессии (кстати, это относится и к вариациям в строках 5 и 6, если они окажутся незначимыми). Разумеется, при указанном перерасчете степени свободы вариаций, включаемых в остаточную вариацию, должны прибавляться к числу степеней свободы последней (fост).

Таблица II.5.1

Расположение растворов стандарта и испытуемого образца

при трехдозном варианте метода диффузии в агар

┌─────┬──────────────────────────┬─────┬──────────────────────────┐

│Номер│Порядок внесения растворов│Номер│Порядок внесения растворов│

│чашек│  в цилиндры  │чашек│  в цилиндры  │

│  ├───┬───┬───┬────┬────┬────┼─────┼────┬────┬───┬───┬───┬────┤

│  │ 1 │ 2 │ 3 │ 4  │ 5  │ 6  │  │ 1  │ 2  │ 3 │ 4 │ 5 │ 6  │

├─────┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼─────┼────┼────┼───┼───┼───┼────┤

│  │ S │ S │ U │ S  │ U  │ U  │  │  S │ U  │ U │ S │  S│  U │

│1  │D1 │D2 │D2 │D3  │D1  │D2  │ 17  │ D1 │D2  │D3 │D1 │ D3│ D2 │

├─────┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼─────┼────┼────┼───┼───┼───┼────┤

│  │ S │ S │ U │ S  │ U  │ U  │  │  S │ U  │ S │ S │  U│  U │

│2  │D1 │D2 │D1 │D3  │D3  │D2  │ 18  │ D1 │D2  │D3 │D2 │ D3│ D1 │

├─────┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼─────┼────┼────┼───┼───┼───┼────┤

│  │ S │ S │ U │ U  │ S  │ U  │  │  S │ U  │ S │ S │  U│  U │

│3  │D1 │D2 │D3 │D2  │D3  │D1  │ 19  │ D1 │D2  │D3 │D2 │ D1│ D3 │

├─────┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼─────┼────┼────┼───┼───┼───┼────┤

│  │ S │ S │ U │ U  │ S  │ U  │  │  S │ U  │ U │ S │  U│  S │

│4  │D1 │D2 │D1 │D3  │D3  │D2  │ 20  │ D1 │D2  │D3 │D3 │ D1│ D2 │

├─────┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼─────┼────┼────┼───┼───┼───┼────┤

│  │ S │ S │ U │ U  │ S  │ U  │  │  S │ U  │ U │ S │  U│  S │

│5  │D1 │D2 │D1 │D2  │D3  │D3  │ 21  │ D1 │D2  │D1 │D3 │ D3│ D2 │