Научные разработки НИУ РАМН - практическому здравоохранению (стр. 21 )

Проведены приемочно-технические испытания. Утверждены ТУ 9398-010-10839330-2012 на набор реагентов «БиоСет-актив-ЦМВ». Согласована и утверждена инструкция по применению набора реагентов. Проведена экспертиза нормативной документации на набор «БиоСет-актив-ЦМВ», медицинское изделие представлено в Федеральную службу по надзору в сфере здравоохранения для проведения государственной регистрации.

Тест-система «БиоПрайм-ЦМВ» (ФБГУ «НИИВС им. » РАМН; «Биосервис»)

Разработан набор реагентов «БиоПрайм-ЦМВ» для выявления низкоавидных IgG-антител к цитомегаловирусу. Набор предназначен для выявления низкоавидных антител к цитомегаловирусу в сыворотке/плазме крови человека методом иммуноферментного анализа с целью диагностики первичной инфекции.

Технические испытания набора реагентов «БиоПрайм-ЦМВ» показали, что чувствительность набора по сывороткам стандартной панели предприятия, содержащим низкоавидные IgG-антитела к цитомегаловирусу составляет 100 %, специфичность по сывороткам стандартной панели предприятия, не содержащих низкоавидных IgG-антител к цитомегаловирусу составляет 100 %. При проведении медицинских испытаний набора реагентов «БиоПрайм-ЦМВ» получены соответственно следующие показатели клинико-диагностической эффективности: диагностическая чувствительность – 94%, 94%, диагностическая специфичность – 98 %, 97 % при 100% воспроизводимости результатов исследований.

Проведены приемочно-технические испытания. Утверждены ТУ 9398-013-10839330-2012 на набор реагентов «БиоПрайм-ЦМВ». Утверждена инструкция по применению набора реагентов «БиоПрайм-ЦМВ».

Проведена экспертиза нормативной документации на набор реагентов, медицинское изделие представлено в Федеральную службу по надзору в сфере здравоохранения для проведения государственной регистрации.

Микрофлюидный гибридизационный биочип для скринингового анализа бактериальных патогенов в биопробе (НИИ общей патологии и патофизиологии РАМН; НИИ физических проблем им. ; МГУ им. Минобрнауки России; технологии»)

Значение универсальной полимеразной цепной реакции (УПЦР), направленной на амплификацию определенных участков генов 16S рибосомальной РНК с применением наборов праймеров к консервативным областям, в последние годы значительно возросло. В комбинации с секвенированием ампликонов (УПЦР-СЕК) данный метод предоставляет возможность эффективной родовой и видовой идентификации бактериальных патогенов в клинических образцах, а также открытия новых видов бактерий. Особую ценность УПЦР представляет для бактерий с необычными фенотипическими особенностями, а также редких, медленно растущих или трудно культивируемых видов, кроме того, использование УПЦР актуально для тех инфекций, для которых инфекционный патоген методами культивирования установить не удается. Наибольшей трудностью при внедрении технологии УПЦР-СЕК в клинику является отсутствие автоматизации.

Предлагается альтернативное решение для анализа ампликонов, получаемых в ходе УПЦР – гибридизационный анализ на матрицах иммобилизованных олигонуклеотидов в микрофлюидном формате УПЦР-мфЧИП. Разрабатываемый микрофлюидный гибридизационный чип представляет собой метод метагеномного анализа бактериальных сообществ.

В ходе выполнения проекта осуществляется адаптация метода амплификации фрагментов генов рибосомальной 16S РНК прокариот (УПЦР) для последующего гибридизационного анализа в разрабатываемой микрофлюидной системе, что может быть использовано для высокопроизводительной диагностики широкого спектра бактериальных патогенов с определением видовой/родовой принадлежности возбудителя в биообразцах.

Изготовлен лабораторный макет микрофлюидного чипа, представляющий собой вариант реализации микрофлюидной системы для гибридизации и ориентированный на одновременную многопараметрическую диагностику панели бактериальных патогенов. Основные этапы микрочипового анализа объединены в единый процесс, что способствует сокращению времени анализа, росту производительности и воспроизводимости результатов. Данная система будет обеспечивать не менее 10-кратного сокращения времени гибридизации, большую чувствительность и специфичность по сравнению со стандартными микрочипами.

Заявленное повышение чувствительности, специфичности и времени анализа достигается за счет использования основных преимуществ микрофлюидного формата: прецизионного управления потоками жидкости, малого объема реакционных смесей, уменьшения отношения объема к площади поверхности.

Подана заявка на получение патента.

Разработанный микрофлюидный чип может быть использован в различных областях хозяйственной деятельности, где решаются задачи оценки биоразнообразия бактериальных сообществ (различные области биомедицины, сельское хозяйство, экология, пищевая промышленность и ряд других).

Способ серодиагностики иксодового клещевого боррелиоза (НИИ биохимии СО РАМН)

Методами генной инженерии получено пять рекомбинантных химерных иммунодоминантных белков западносибирского изолята B.garinii 2007T. Методом ИФА подтверждена пригодность каждого из них для серодиагностики иксодового клещевого боррелиоза (ИКБ). На их основе разработан способ серодиагностики ИКБ методом иммуноферментного анализа.

На основе трёх из пяти отобранных химерных антигенов, обеспечивающих высокую специфичность (~95%) и чувствительность (80-85%) иммуноферментной диагностики ИКБ, сконструирован макет иммунохроматографической тест-системы. Проведена апробация на сыворотках больных ИКБ и здоровых доноров. В сравнении с известными аналогами тест-система позволит повысить специфичность и чувствительность способа диагностики иксодового клещевого боррелиоза в сибирских регионах, проводить дифференцированную диагностику ранней стадии и стадии диссеминированной инфекции.

Для практической реализации разработки, т. е. внедрения её в производство потребуется финансовая поддержка в размере 6 млн. рублей для отработки технологии получения тестов на базе (Новосибирск), проведения экспертизы и получения сертификата в Минздраве России.

Подана заявка на изобретение: «Рекомбинантные химерные полипептиды, несущие эпитопы различных иммунодоминантных белков спирохет комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato, и способ серодиагностики иксодового клещевого боррелиоза» (г.).

Составлены технические условия изготовления иммунохроматографической тест-системы для диагностики иксодового клещевого боррелиоза и инструкция по её применению для предоставления на экспертизу в Минздрав России.

Способ диагностики состояния и индивидуальных особенностей иммунной системы человека (НИИ общей патологии и патофизиологии РАМН; -исследовательский институт атеросклероза» (Сколково)

Разработана клеточная тест-система для диагностики статуса про - и противовоспалительной активации макрофагов моноцитарного происхождения. В основе разработанной тест-системы лежит специально подобранная комбинация цитокинов интерлейкина-4 (IL-4) и трансформирующего фактора роста-β (TGF-β).

Тест-система для исследования механизма регуляции дифференцировки макрофагов может быть использована для проведения исследований на первичной культуре чистых макрофагов и позволяет оценивать дозовую и концентрационную зависимость эффекта активации клеток, выявлять специфические маркеры активации.

Подана заявка на изобретение: «Способ диагностики состояния и индивидуальных особенностей иммунной системы человека» (г.).

Оформляется регистрация технологии.

Область применения разработки: кардиология, онкология, неврология, иммунология

Реализовано в практике работы Научного центра неврологии РАМН.

Метод выявления пролиферирующих клеток с использованием антител к циклину D1(НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН)

Разработанная технология предназначена для визуализации клеток, готовящихся к митотическому делению.

Данная технология является альтернативой существующим методам оценки пролиферации, основанным на подсчете митотического индекса. Подобные методы учитывают лишь делящиеся клетки и не позволяют оценить число клеток, находящихся в стадии синтеза ДНК. Более информативные методы с применением бром-дезоксиуридина или 3Н-тимидина являются дорогостоящими и трудоемкими.

Разработанный метод основан на использовании поликлональных антител кролика к циклину D1. Метод позволяет идентифицировать продукт иммуногистохимической реакции и визуализировать его после обработки препаратов хромогеном DAB+ (Dako, Дания). В результате обработки ядра клеток, готовящихся к митотическому делению, интенсивно окрашиваются в коричневый цвет.

Преимущества метода – позволяет получить результаты в течение одного рабочего дня и обеспечивает качественную визуализацию клеток, готовящихся к митозу.

Реализовано в практике работы НИИЭМ СЗО РАМН при изучении пролиферации клеток в эмбриогенезе при развитии мозга.

Способ одномоментного определения длины теломер и количества делений в популяции пролиферирующих клеток (НИИ клинической иммунологии» СО РАМН)

Разработанный способ включает измерение длины теломер методом flow-FISH в клетках, дифференцированных по количеству совершенных делений с помощью витального красителя без предварительного выделения пролиферирующих клеток, с использованием кросслинкера аминогрупп Bis(sulfosuccinimidyl)suberat (BS3). Предлагаемый способ позволяет одномоментно определять длину теломер в клетках с известным количеством совершенных делений.

Значительным преимуществом этого метода является одномоментное разделение клеток по количеству совершенных делений, поверхностному маркеру и определение в них средней длины теломер.

Имеется патент РФ на изобретение: «Способ одномоментного определения длины теломер и количества делений в популяции пролиферирующих клеток» (№ 000 от 27.02.12г.).

Реализовано в практике работы клиники иммунопатологии НИИКИ СО РАМН.

Набор реагентов для определения содержания антител IgG и IgM к хорионическому гонадотропину человека в сыворотке крови (Анти ХГЧ-ИФА) (ФГБУ НИИ морфологии человека РАМН, -ЭМ»)