Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии (стр. 19 )

Вместе с патологическим материалом направляют сопроводи­тельную, в которой указывают: название хозяйства (адрес); сведе­ния о признаках болезни, применяемых средствах лечения, корм­лении животных и уходе за ними; данные об эпизоотической об­становке в прошлом и настоящее время; какие и когда проводи­лись прививки, а также вид и возраст павшего животного; перечень материала, направляемого для исследования; основные патологические изменения в трупе; предполагаемая причина па­дежа; на какое заболевание необходимо провести исследование.

Поступивший в лабораторию неконсервированный материал можно хранить при 4°С в течение 1...2сут; консервированный в 50%-м растворе глицерина (кусочки органов) — несколько недель; для длительного хранения материал замораживают при —15...—20 С.

Кровь для серологических исследований у крупного рогатого скота, овец, лошадей берут из яремной вены в стерильные бакте­риологические пробирки в объеме 10... 15 мл, у свиней — из хвос­товой, передней краниальной вен или глазного синуса, у птиц — из подкрылковых вен, у кроликов — из краевой ушной вены. Про­бирки с кровью выдерживают до формирования сгустка в тепле (1,5...2 ч), затем для отделения от стенок пробирки обводят сгус­ток стеклянной чистой палочкой или спицей. Для отстаивания

сыворотки пробирки с кровью помещают в холодильник (4...6Х) на 18...20ч. После ретракции сгустка сыворотку крови переливают в серологические пробирки с резиновыми пробками. При необхо­димости сыворотку крови консервируют, добавляя в пробирку не­сколько крупинок борной кислоты, тиомерсал (конечное разведе­ние 1 : 10 000), или замораживают.

Принципиальная схема микробиологического исследования.

Диаг­ностика инфекционных болезней включает в себя комплекс ис­следований: эпизоотологические, клинические, патологоанатоми-ческие, микробиологические. При важности каждого из них и ценности именно комплексного подхода микробиологическое ис­следование особенно важно, поскольку с его помощью либо не­посредственно обнаруживают этиологический (причинный) агент болезни, либо косвенными специфическими иммунологическими методами доказывают его присутствие.

Микробиологическое исследование состоит из следующих этапов;

1. Обнаружение возбудителя непосредственно в исследуемом
материале без изоляции в виде чистой культуры на питательных
средах с помощью разных методов:

неиммунологические методы: а) выявление возбудителя путем микроскопического исследования окрашенных (по Граму и др.) мазков-отпечатков из органов и тканей; б) обнаружение при по­мощи генетических методов (генные зонды, ПЦР) нуклеиновых кислот возбудителя;

иммунологические методы: выявление антигенов возбудителя с помощью различных серологических реакций (РП, РДП, МФА, ИФА, РИГА и др.).

2. Обнаружение возбудителя (его токсинов) с помощью био­
пробы: заражение исследуемым материалом чувствительных лабо­
раторных животных.

3.  Выделение культуры возбудителя из исследуемого материа­
ла путем посева на питательные среды.

4.  Идентификация выделенной культуры микроорганизмов по
совокупности морфологических, тинкториальных, культуральных,
ферментативных и патогенных свойств. При этом широко исполь­
зуют серологические (РА, РП, РДП, ИФА и др.), а в случае необ­
ходимости генетические методы идентификации изолированных
микроорганизмов.

5. Серологическая (ретроспективная) диагностика. Обнаруже­
ние специфических следов пребывания возбудителя — антител в
сыворотке крови исследуемых животных при помощи различных
серологических реакций (РА, РСК, ИФА и др.). Серологические
реакции наиболее широко применяют при диагностике хроничес­
ки протекающих бактериозов.

Аллергические исследования в отличие от перечисленных выше методов проводят непосредственно на животных в хозяй­стве: при помощи диагностических аллергенов выявляют состоя-

ние гиперчувствительности замедленного типа. Аллергическую пробу в основном применяют для иммунологической диагностики хронических бактериозов.

Изложенная схема отражает возможные, но не обязательные направления микробиологических исследований. При каждой конкретной инфекции схему исследования строят с учетом осо­бенности биологии возбудителя и инфекционного процесса.

Определение патогенности.

Патогенность микроорганизма, вы­деленного при исследовании патологического материала, опреде­ляют с помощью биологической пробы (биопробы), т. е. зараже­нием лабораторных животных: белых мышей и крыс, морских свинок, кроликов, голубей, кошек, а также собак (чаще щенков), кур, мелкого и крупного рогатого скота (телят), обезьян, лошадей и др. Выбор вида животного для биопробы основывается на его восприимчивости к исследуемому объекту. Для биопробы берут не только выделенную микробную культуру, но и непосредственно патологический материал, из которого для этой цели готовят взвесь растертой в стерильной ступке ткани органов, гной, слизь, разбавленные физиологическим раствором. Биологическая проба необходима также при установлении безвредности биологических препаратов (вакцин, сывороток).

Помещение для содержания лабораторных животных (вива­рий) должно иметь несколько отделений: карантинное, клиничес­кое для выполнения определенных работ (взятие крови, зараже­ние, вскрытие и др.), кладовую, кухню и др. Перед заражением животных метят: кроликов и морских свинок — металлическими сережками с номерами, белых мышей и крыс — раствором краски (фуксина, метиленовой сини и др.) (рис. 39).

Для удобства и безопас­ности работы животных фиксируют (рис. 40 и 41). Морских свинок помощник держит брюшком вверх так, чтобы средний палец левой руки находился на шее, а большой и 'указательный — под передними конечнос­тями, правой рукой при­

Рис 39. ключ к мечению зараженных животных

держивают задние конечно­сти. Мышь берут одной ру­кой за кончик хвоста, дру­гой — за кожную складку затылка, ближе к ушам, и повертывают в удобное для манипуляции положение.

Крыс фиксируют корнцан гами, захватив складку

Рис. 40. Фиксация и заражение мышей

Рис. 41. Фиксация и заражение морских свинок

кожи затылка, плотно прижимают голову к поверхности стола, другой рукой держат за хвост и поворачивают в удобное положе­ние, оттягивая корнцангом голову.

Животных заражают следующими методами: накожным (ска­рификация), внутрикожным, подкожным, внутримышечным, внутривенным, внутрибрюшинным, оральным, интраназальным, интрацеребральным и в переднюю камеру глаза. Используемые при этом инструменты (шприцы, иглы и др.) должны быть сте­рильными.

При скарификации скальпелем делают небольшой надрез кожи — насечку и в нее апплицируют исследуемый матери­ал или бактериальную культуру. Испытуемый материал можно также втирать жесткой щеточкой. Место заражения выстригают и дезинфицируют.

При внутрикожном способе пальцами левой руки от­тягивают кожу и в образующуюся между ними кожную складку вводят кончик иглы. Вводимая доза материала не должна превы­шать 0,2 мл. Показатель правильного введения — небольшая при­пухлость величиной с горошину.

При подкожном инфицировании пальцами левой руки оттягивают кожу; у кроликов — со стороны спины несколько сбо­ку, у белых мышей и крыс — со спины ближе к основанию хвоста. В образовавшийся «кармашек»-складку вводят иглу шприца, затем его содержимое. Объем вводимого вещества не должен превышать для мышей 1 мл, для крыс, морских свинок— 10 мл, кроликов — 20...25 мл.

При внутримышечном заражении инъецируемый ма­териал чаше вводят с внутренней поверхности бедра. Голубей и

кур можно заражать также и в грудную мышцу. Доза введения мышам составляет 0,5 мл, морским свинкам и крысам — 3...5 мл, кроликам — 5...8 мл. Большой объем лучше вводить дробно в 2...3 места.

При внутрибрюши ином заражении животное фик­сируют головой вниз, иглу шприца вводят в нижнюю треть живо­та, чуть отступя от белой линии.

Внутривенно исследуемый материал кроликам вводят в краевую вену уха, мышам и крысам — в вену хвоста. Перед зара­жением место инъекции протирают тампоном, смоченным ксило­лом или теплой водой, чтобы вызвать наполнение сосудов кровью.

При интрацеребральном заражении животных фиксируют в спинном положении. У кроликов для этой цели тре­панируют череп в участке между надбровным углом и черепным гребнем. Поле операции выстригают, дезинфицируют, пальцами левой руки растягивают кожу над глазницей параллельно череп­ному гребню и рассекают ее (раздвигают ее края), крестообразно разрезают надкостницу, маленьким трепаном прокалывают череп­ную кость и извлекают небольшой кусочек ее; из шприца вводят 0,2 мл исследуемого материала. После этого соединяют края над­костницы, края кожной раны заливают коллодием.

У мышей и крыс трепанацию не делают, а легким проколом костной ткани вводят кончик иглы и инъецируют материал.

Интраназально заражение осуществляют капельным способом, используя глазную пипетку. Предварительно животное слегка наркотизируют — к носу прикладывают вату, смоченную эфиром.

При оральном заражении исследуемый материал добав­ляют в корм, воду или вводят через небольшой зонд.

В случае гибели зараженного животного труп вскрывают, со­блюдая правила асептики, и производят бактериологическое ис­следование.

Для вскрытия труп фиксируют в спинном положении (брюш­ком вверх) на деревянной доске или лотке с застывшим парафи­ном; конечности растягивают и закрепляют мелкими гвоздиками. Кожно-шерстный покров дезинфицируют 5%-м раствором фено­ла или лизола. Разрезают кожу вдоль белой линии от промежности до грудино-ключичного сочленения, а затем делают поперечные надрезы (рис. 42). Отпрепарированные кожные лоскуты отводят в сторону. Так же надрезают брюшину, вскрывают брюшную по­лость, подрезают ребра, диафрагму, вскрывают грудную полость. При вскрытии обращают внимание на патологоанатомическую картину.