Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии (стр. 36 )

Лабораторный диагноз на сальмонеллез разных видов живот­ных ставят на основании результатов бактериологического иссле­дования патологического материала с обязательным изучением у выделенных бактерий морфологических, культурально-биохими-ческих и антигенных свойств.

Биопрепараты. Концентрированная формолквасцовая вакцина против сальмонеллеза телят.

Вакцина против сальмонеллеза поросят. Готовят из трех штам­мов в следующем соотношении: S. choleraesuis— 50 %, iS". typhimuriun — 25 %, S. dublin — 25 %. Активность вакцины проверя­ют на голубях.

Ассоциированную (поливалентную) вакцину против сальмо­неллеза, пастереллеза и диплококковой септицемии поросят гото­вят из штамма S. choleraesuis, четырех штаммов P. multocida и четы­рех штаммов диплококка. Иммуногенные свойства вакцины про­веряют на голубях и белых мышах.

Формолтиомерсаловая вакцина против колибактериоза и саль-монелллеза пушных зверей, птиц, телят и поросят представляет собой инактивированную формалином и тиомерсалом суспензию эшерихий и сальмонелл. В качестве адъюванта применяют алюмо-калиевые квасцы и хлорид кальция.

Сухую живую вакцину против сальмонеллеза свиней из штам­ма ТС-177 готовят из аттенуированного штамма S. choleraesuis ТС-177, зависимого по тиамину, с пониженной вирулентностью для белых мышей и морских свинок. Вакцину проверяют на чистоту роста, безвредность на белых мышах и морских свинках.

Вакцина против сальмонеллеза телят из аттенуированного штамма S. dublin № 6.

Вакцина живая сухая против сальмонеллеза водоплавающей птицы.

Вакцина против сальмонеллеза свиней из суттрессорного ревер-танта.

Вакцина формолтиомерсаловая поливалентная против сальмо­неллеза овец.

Поливалентная антитоксическая сыворотка против сальмонел­леза телят, поросят, ягнят, овец и птиц. Получают из крови волов-продуцентов, иммунизированных поливалентным антигеном, со­стоящим из четырех серотипов сальмонелл: S. dublin, S. lyphimurium, S. abortusovis, S. choleraesuis. Сыворотку проверяют на стерильность, безвредность и активность.

Бактериофаг против сальмонеллеза и колибактериоза телят и бактериофаг против пуллороза (тифа птиц) готовят из фагов, вы­деленных от переболевших сальмонеллезом или колибактериозом животных.

Сальмонеллезный антиген для серологической диагностики представляет собой гомогенную инактивированную суспензию сальмонелл (концентрация клеток 109/мл). Применяют для серо­логической диагностики сальмонеллезов в пробирочной РА.

Пуллорозный эритроцитарный антиген представляет собой 10 %-ю суспензию эритроцитов барана, сенсибилизированных по-лисахаридно-полипептидной фракцией S. galiinarum-pullorum. Применяют для прижизненной диагностики сальмонеллеза птиц реакцией непрямой гемагглютинации на стекле с каплей крови.

Цветной антиген для диагностики пуллороза птиц представля­ет собой гомогенную суспензию сальмонелл, убитых формалином и окрашенных кристалл виол етом. Применяют в кровекапельной реакции агглютинации на стекле для прижизненной диагностики сальмонеллеза птиц.

Флуоресцирующие сальмонеллезы О-сыворотки получают из крови кроликов, иммунизированных формалинизированными ан­тигенами. Сыворотки адсорбируют, осаждают сульфатом аммония глобулины и проводят люминесцентное мечение очищенных гло­булинов флуоресцеинизотиоционатом. Выпускают сыворотки к сальмонеллам 5 серогрупп и комплексную сыворотку.

Наборы сывороток сальмонеллезных О-комплексных и моно-рецепторных О - и Н-агглютинирующих предназначены для эксп­ресс-диагностики в РА на предметном стекле 33 групп сальмо­нелл, выделяемых от животных, из продуктов животного проис­хождения и объектов внешней среды.

Тема 15. БРУЦЕЛЛЫ И ВОЗБУДИТЕЛЬ ТУЛЯРЕМИИ

Возбудитель бруцеллеза. Впервые был открыт и описан Брюсом

(1886), в честь которого этот микроорганизм получил родовое на­звание Brucella, а семейство — Brucellaceae. В патологии животных имеют значение Brucella melitensis, В. abortus, В. suis. Названные виды бруцелл имеют культурально-морфологическое сходство, общие антигены. При гибели, разрушении бруцелл освобождают­ся эндотоксины. Бруцеллы являются возбудителями инфекцион­ного (контагиозного), хронически протекающего заболевания у животных и человека — бруцеллеза. Болезнь проявляется абортом, а также возможно воспаление суставов, орхиты. Чаще заболевание протекает бессимптомно. Особой патогенностью для человека (и мелкого рогатого скота) обладает В. melitensis. Основные методы диагностики бруцеллеза: бактериологический (особенно при на­личии абортов), серологический и аллергический.

Бактериологическое исследование. При жизни животного посылают абортированный плод (или перевя­занный с двух сторон желудок плода с содержимым), истечение из родовых путей, плодные оболочки или кусочек плаценты, около­плодную жидкость, молоко. Посмертно (после убоя) в лаборато­рию направляют трубчатую кость (костный мозг), кусочки пече­ни, почки, селезенки, молочной железы, лимфатические узлы, матку. По мере необходимости отправляют также пробы воды, по­чвы, подстилки. При взятии материала от животных необходимо соблюдать правила асептики и личной гигиены. Кусочки тканей можно консервировать в 30 %-м глицерине.

Микроскопия. Препараты из присланного материала фиксируют; часть из них окрашивают по Граму, часть — специ­альным методом (Козловского, Шуляка и др.). По методу Козлов­ского препараты, фиксированные над пламенем горелки, окраши­вают свежеприготовленным горячим 2%-м раствором сафранина (если раствор остыл, его наливают на препарат и подогревают снизу до появления паров в течение 3...5 мин. Затем краску слива­ют и докрашивают 1%-м водным раствором малахитовой (или бриллиантовой) зелени (около 1 мин). По методу Шуляка фикси­рованный мазок окрашивают 2 мин карбол-фуксином (1 : 5), слег­ка промывают и докрашивают 2%-м водным раствором метилено-вой сини — 3...5 мин.

Морфология. Бруцеллы — мелкие палочковидной (кок-коподобной) формы бактерии, 0,6...1,5мкм длиной, 0,3...0,5 мкм в диаметре. Споры не образуют. Неподвижны. По Граму красятся отрицательно, по методу Козловского (или Шуляка) — в красный цвет; остальные микробы — в зеленый (или синий) цвет. В препа­рате располагаются изолированно или небольшими скоплениями.

Выделение чистой культуры. Культу-ральные свойства. Из различных участков патологичес­кого материала пипеткой производят посев на жидкие и плотные питательные среды: глюкозо-печеночные, сывороточные, на кар­тофельные среды с добавлением глицерина, глюкозы; рН среды 7,0...7,2. В первичных посевах рост бруцелл проявляется медленно при длительном инкубировании в термостате при 37 "С. Учитывая, что одни виды бруцелл аэробы, а другие — микроаэрофилы (В.abortus), для получения первичных культур посевы помещают в термостат в обычных условиях, другую часть — сначала в эксика­тор с повышенным содержанием диоксида углерода (до 10...20 %), а затем уже в термостат. Рост появляется спустя 30...40 сут, самое раннее —на 7... 10-е сутки. По мере адаптации к искусственным средам бруцеллы растут более быстро (1...2сут).

На МППА рост проявляется мелкими прозрачными колониями с ровными краями, с голубоватым оттенком, которые впослед­ствии сливаются и образуют сплошной мутный сероватый налет. Колонии — S - и R-формы. На картофеле нередко колонии пиг­ментированы (коричневого цвета). Типичные колонии пересева­ют па специальные питательные среды. Полученную чистую куль­туру проверяют на биохимическую активность, а также проводят серологическую идентификацию посредством РА на стекле со специфической сывороткой в разведении 1: 2...1: 50.

В МПБ рост вначале в виде равномерного помутнения, в дальнейшем образуются пристеночное кольцо и небольшой осадок. Для получения чистой культуры бруцелл из загрязнен­ного материала следует сделать посев на селективную среду Козловского (МППА с глюкозой, генцианвиолетом и малахито­вой зеленью).

Биохимические свойства выражены слабо. Же­латину и свернутую сыворотку бруцеллы не разжижают, индол не образуют. Сероводород и аммиак образуют лишь в зависимости от вида и штамма. В. suis обильно продуцирует сероводород, а В. abortus— менее интенсивно. Молоко не свертывают.

Биопроба осуществляется заражением морских свинок, которых предварительно подвергают серологическому контролю. В случае отрицательного результата животным инъецируют под­кожно 1...2мл суспензии из тканей присланного материала — свинка не погибает. Через 8...10 сут у зараженной свинки берут кровь (в случае отрицательного или сомнительного результата кровь берут повторно через 20...30 сут), исследуют в РА в разве­дении 1: 5...1: 10 (до 1: 80). Положительный результат РА в раз­ведении 1: 6... 1 : 10 указывает на инфицированность морской свинки. По истечении 30...45 сут после заражения свинку убива­ют и исследуют бактериологически. При отрицательном резуль­тате РА морских свинок убивают спустя более длительный пери­од (6...8 нед) и бактериологически исследуют их ткани и органы. Обязательно делают посев из паховых, подчелюстных, шейных, брыжеечных лимфоузлов, печени, селезенки, почек, костного мозга.

Методы дифференциации видов бруцелл. Для дифференциации используют чистые культуры бруцелл, об­разующие S-форму колоний.

Проба с трипафлавином. Бактериологической петлей берут мик­робную массу 48-часовой агаровой культуры и эмульгируют на предметном стекле в капле трипафлавина, разведенного физиоло­гическим раствором NaCl 1 : 500. Если культура диссоциирована, быстро наступает агглютинация с образованием хлопьев. Недис-социированная культура при эмульгировании в капле образует го­могенное помутнение; хлопья не выпадают.

Окраска колоний кристаллвиолетом. В культуру, выросшую в чашке Петри, пастеровской пипеткой вносят краску в разведении 1 : 2000, приготовленную ex tempore. Через 5 мин после отсасыва­ния краски из чашки колонии просматривают под лупой. Диссо­циированные R-формы бруцелл окрашиваются от темно-фиоле­тового до светло-синего цвета, S-формы — в светло-желтый или светло-зеленый цвет.