Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии (стр. 51 )

Для аллергической диагностики лимфангита можно использо­вать гистоплазмин (Королевой) — фильтрат 3...4-месячной куль­туры криптококка. При сомнительном результате лабораторного исследования применяют дифференциальную диагностику лим­фангита и сапа, используя глазную пробу с маллеином и подкож­ную пробу с гистоплазмином. Проводят также серологическое ис­следование — РСК с сапным антигеном.

Классификация криптококка неясна: одни исследователи при­числяют его к бластомицетам, другие, на основании некоторых биологических данных,— к несовершенным грибам.

Микотоксикозы (кормовые отравления). Заболевания, вызывае­мые грибами, продуцирующими токсины. Основные возбудители: грибы Stachybotrys alternans, Dendrochium toxicum, Fusarium sporotrichioides, Ciaviceps paspali, Aspergiltus jlavus, Aspergillus fumigatus, Penkillium rubrum, Claviseps purpurea, Myrothecium vericarria. Некоторые виды грибов, вызывающие микотоксикозы, могут быть причиной микозов, как, например, A. fumigatus. К ми-котоксикозам наиболее восприимчивы лошади, свиньи, овцы, до­машняя птица. Менее восприимчив крупный рогатый скот. Ми-котоксикозами болеет и человек. Основной источник возникнове­ния заболевания — корма, пораженные любым из перечисленных выше видов грибов. Путь инфицирования — алиментарный.

Материал для микологического исследо­вания. Отбирают пробы корма (из складских помещений, ос­татков корма из кормушек, содержимого желудочно-кишечного тракта). В зависимости от вида корма отбор проб производят в со­ответствии с имеющимися ГОСТами. Общая масса корма для ди­агностического исследования составляет 0,5... 1 кг. Пробу корма помещают в тканевые мешочки, бумажные пакеты. При отборе проб учитывают локальное расположение отдельных видов грибов в пораженном корме. При диагностике микотоксикозов предвари­тельно исключают инфекционные заболевания животных бакте­риальной и вирусной этиологии, протекающие с аналогичной клинической картиной, наличие в кормах ядовитых растений и их семян, а также ядохимикатов (удобрения, пестициды).

Диагностика микотоксикозов включает предварительное орга-нолептическое исследование, микроскопию, выделение чистой культуры и биопробу. Для микроскопировання в каплю дистилли­рованной воды или физраствора на предметном стекле вносят со-скоб видимых поражений с поверхности корма (налет), накрыва­ют покровным стеклом, просматривают при средней степени уве­личения без иммерсии. При сильном поражении корма грибом пробу измельчают, помещают в колбочку, заливают физиологи­ческим раствором и взбалтывают в течение 20 мин. Каплю полу­ченной взвеси наносят на предметное стекло, покрывают покров­ным стеклом и микроскопируют.

Токсичность. Определяют при скармливании корма или вытяжки из него лабораторным животным. Биопробу можно ста­вить и на куриных эмбрионах. В ветеринарных лабораториях часто применяют кожную пробу — РКТ (реакция кожной токсичности) на кроликах (рис. 67). Для этого измельченную навеску пробы кор­ма (50 г) помешают в патрон из фильтровальной бумаги и экстраги­руют в аппарате Соксклета в течение 6 ч, используя серный эфир (ацетон или хлороформ). Экстрагировать можно и в стеклянной банке с притертой пробкой в течение 24 ч. Экстракт сливают, выпа­ривают в вытяжном шкафу на водяной бане при 45...50 °С. На све­жевыбритый участок кожи (4...5 см2) кролика наносят и втирают полученный экстракт. Через сутки, если какие-либо изменения от­сутствуют, втирание повторяют. В положительных случаях через 1...3 сут развивается гиперемия, отечность, вплоть до некроза. От­сутствие реакции на месте введения в течение 3 сут свидетельствует о нетоксичности корма (гриба). При постановке данной пробы сле­дует исключить кислотность корма.

Рис. 67. Дерматоиекротическая проба:

А — отрицательная; Б— положительная

При некоторых микотоксикозах с целью идентификации воз­будителя разработана реакция иммунофлуоресценции.

Для выделения чистой культуры (с учетом корма и предполагаемого вида гриба) смыв с поверхности пора­женного корма засевают на агар Сабуро, среду Чапека или на фильтровальную бумагу, пропитанную средой Ван-Итерсона в чашках Петри. Кроме того, можно произвести посев, непосред­ственно помещая пораженное зерно, соломины на плотные пита­тельные среды.

При определении степени поражения корма грубый корм из­мельчают и обрабатывают формалином в разведении 1 : 300 в тече­ние 1 ч или денатурированным спиртом 6 мин, промывают 2...3 раза водопроводной водой и вносят на питательную среду. Культивиру­ют при 22.,.25 X, проверяя рост через 3, 5, 7 и 10 сут. С появлением роста колоний культуру микроскопируют, пересевают споры или мицелий, проверяют токсичность, используя для биопробы по 3...5 особей белых мышей, белых крыс, морских свинок, кроликов, цыплят, утят, гусят, голубей, кошек. Для определения токсичности корма допускается использовать также цыплят в возрасте 2...3 мес, а также молодых мышат, морских свинок, поросят в возрасте до 10 сут. В зависимости от степени токсичности гриба, дозы и спосо­ба введения животным клиническая и патологоанатомическая кар­тина заболевания проявляются неодинаково.

Определение афлатоксинов в корме, продуцируемых токсиген-ными грибами родов Aspergillus, Petiicillium и Rhizopus, производят на тонкослойных хроматографических пластинках по флуорес­ценции экстрактов в ультрафиолетовом свете (чувствительность 0,5 мкг в пробе корма массой 20 г).

При оценке корма, пораженного тем или иным токсигенным грибом, следует пользоваться специальными инструкциями и ме­тодическими указаниями.

Возбудитель стахиботриотоксшсоза (Stachybotrys alternans). За­болевание возникает при скармливании пораженного корма у ло­шадей, реже у крупного рогатого скота и свиней. К токсину гриба чувствителен и человек. Токсин в химическом отношении являет­ся стероидом. Клиническое проявление стахиботриотоксикоза у лошадей характеризуется поражением слизистой оболочки рото­вой полости и последующих отделов пищеварительного тракта, слюнотечением, образованием язвенных поражений. Возможны синдромы возбуждения или депрессии с летальным исходом. У крупного рогатого скота заболевание проявляется обильным слю­нотечением, нарушением функции пищеварительного тракта.

Возбудитель стахиботриотоксикоза — энергичный разрушитель целлюлозы, поэтому он хорошо растет на поверхности сена, соло­мы, образуя черный сажистый налет. Пораженный корм направ­ляют в лабораторию.

Морфология. У гриба септированный многоклеточный мицелий, на концах конидиеносцев заметны стеригмы (нечетное количество —5...7); сформированные конидиеспоры имеют есте­ственную коричневую окраску. Большое скопление конидий со­здает черный цвет.

Выделение чистой культуры. Производят посев пораженной пробы корма на среду Сабуро, среду Ван-Итерсона или обычный МПБ. Рост проявляется через 5...7 сут при 24...26 °С. Токсичность чистой культуры проверяют методом кожной пробы на кроликах или скармливанием культуры (выращенной на стери­лизованном овсе) белым мышам, морским свинкам, кроликам, птице. Заболевание может быть воспроизведено у лошадей, свиней, овец при скармливании им инфицированного корма или культуры.

Возбудитель дендродохиотоксикоза (Dendrodockium toxkuin). Вы­зывает нарушение функции центральной нервной системы у ло­шадей. Заболевание возникает вследствие поедания соломы или зерна, пораженного грибом, причем органолептически такой корм внешне выглядит доброкачественным. Характеризуется мол­ниеносным течением, летальным исходом.

D. toxicum имеет разветвленные септированные нити мицелия, конидии эллипсоидной формы с заостренными концами, темно-зеленого цвета, размером (2...4) х (6...8) мкм.

Культивирование. Производят на агаре Чапека. ..4сут рост гриба в виде плотного сплетения гиф мицелия, на котором проявляются зеленые, затем чернеющие спородохии.

Токсичность. Определяют методом кожной пробы на кроликах, а также скармливанием подсвинкам ячменя, специаль­но зараженного грибом. Культурой можно заразить кроликов и морских свинок.

Возбудитель фузарцотоксикоза. Грибы рода Fusarium чаще раз­виваются на злаковых растениях. При фузариотоксикозе наблю­дают дермонекротические поражения, нарушение сердечной де­ятельности, лейкопению. Токсин гриба фузариум в химическом отношении является липотоксолом, сапонин и озарином и их производным. Наиболее часто заболевание животных (включая птиц) вызывают грибы Fusartum sporotrichioidus, F. graminarum, F, monikformae.

Зарегистрированы случаи алиментарного фузариотоксикоза у человека. Корм, пораженный фузарием, внешне не всегда отли­чим.

При микроскопировании в раздавленной капле соскоба вырос­шей культуры обнаруживают макроконидии и микроконидии гри­ба. Макроконидии — серповидно изогнутые с 3...5 перегородками внутри; микроконидии — шаровидной, грушевидной формы, без перегородок или с 1...2 перегородками, возможны хламидоспоры.

Культивирование. Производят на среде Чапека. Не­полноценные зерна светло-серого или розового цвета вносят на питательный субстрат. Через 3...5 сут инкубирования при 22...25 °С появляется рост пышных желтоватых колоний.

Для получения чистой культуры выросшие колонии пересева­ют на сусло-агар или картофельный агар. Выросшую культуру микроскопируют. По форме конидий, величине и числу в них пе­регородок, степени пигментации устанавливают родовую принад­лежность гриба.

Токсинообразование. Разные виды гриба фузариум нуждаются в особых температурных условиях — от 8 до 26 °С. Ток­сичность пробы корма, пораженного фузарием, проверяют на кроликах кожной реакцией (РКТ) или подкожным введением бе­лым мышам. У последних наблюдаются парезы и летальный ис­ход.