Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии (стр. 38 )

На МПЖ возбудитель вначале растет отдельными колониями, затем в виде белого стержня без отростков. Пастереллы ферменти­руют глюкозу, сахарозу, сорбит и маннит с образованием кислоты без газа. Лактозу и дульцит не ферментируют. Антигенная струк­тура изучена недостаточно. Установлено наличие соматического и капсульного антигенов.

Патогенность. Определяют путем заражения голубей, белых мышей или кроликов чистой культурой или суспензией ра­стертых тканей исследуемого материала. Голубям взвесь инъеци­руют внутримышечно в дозе 0,3 мл, белым мышам подкожно — 0,2 мл, кроликам подкожно — 0,5 мл. У кроликов перед заражени: ем следует исключить пастереллоносительство. Для этого им в те­чение трех дней до заражения в каждое носовое отверстие вводят по 2 капли 0,5 %-го водного раствора бриллиантовой зелени. По­являющееся гнойное истечение из носовой полости свидетель­ствует о бактерионосительстве. При заражении пастереллами ги­бель кроликов наступает через 18...26 ч. Из органов павших жи­вотных производят посевы на питательные среды для выделения чистой культуры возбудителя.

Возбудитель гемофилезного полисерозита (Haemophitus parasuis). Относят к семейству PasteureUaceae, роду Haemophilus.

Гемофилезный полисерозит —септическое заболевание поро­сят раннего послеотъемного периода. Характеризуется серозно-фибринозным воспалением плевры, перикарда, брюшины, суста­вов, иногда отмечают менингоэнцефалит.

Бактериологическое исследование. Включа­ет в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, выделение чистой культуры на питатель­ных средах и идентификацию возбудителя по культурально-мор-фологическим, ферментативным и патогенным свойствам.

Исследуют стерильно взятые серозно-фибринозный экссудат из перитонеальной, плевральной, перикардиальной полостей, по­раженных суставов, а также пораженные серозные оболочки.

Микроскопия. Мазки окрашивают по Граму и для обна­ружения капсул. И. parasuis— мелкие грамотрицательные палоч­ки, без спор и жгутиков, образуют капсулу. Возбудитель обнаруживают в виде полиморфных грамотридательных палочек, дипло-бактерий, коротких цепочек из палочек, а также в виде нитей.

Культуральные свойства. Факультативный анаэ­роб, температурный оптимум 37...38 °С. Так как возбудитель — ауксотроф по коферменту ДПН, он не растет на обычных пита­тельных средах. Материал засевают на шоколадный агар в чашках Петри и кровяной МПА с бактерией-«кормилкой».

Шоколадный агар: к расплавленному МПА (рН 7,2...7,4) при температуре 80...90 "С добавляют 10 % стерильной дефибриниро-ванной крови барана или лошади. Компоненты перемешивают и после охлаждения до 50...80 °С среду разливают по чашкам Петри, пробиркам.

На кровяной МПА (5 % крови барана, кролика, лошади) иссле­дуемый материал засевают шпателем по всей поверхности среды. Затем по диаметру чашки в виде двух прямых линий под углом 90° засевают культуру негемолитического штамма S. epidermidis или Е. coli. Посевы инкубируют при 37...38 °С 24...48 ч в условиях обыч­ной атмосферы.

На шоколадном МПА возбудитель формирует мелкие, круглые, прозрачные, с ровными краями и гладкой поверхностью колонии. На кровяном МПА возбудитель растет в виде мельчайших негемо­литических колоний только вблизи «штриха» бактерии-«корм ил-ки» на удалении не более 0,5..Л,0 см. Такой рост Я. parasuis назы­вают «сателлитным»: он связан с тем, что бактерия- «кормил ка» синтезирует ДПН, который диффундирует в толщу агаровой сре­ды, и в этой зоне способен расти ауксотроф Н. parasuis. «Шоколад­ный» агар содержит ДПН, выделенный из разрушенных эритро­цитов, и поэтому И. parasuis растет по всей поверхности питатель­ной среды. Для проверки у культуры бактерий зависимости от ДПН ее дополнительно высевают на сывороточный «шоколад­ный» агар. Культуры возбудителя растут на «шоколадном» и не растут на сывороточном МПА, поскольку в последнем отсутствует ДПН.

Из подозрительных колоний на «шоколадном» агаре или «сал-литных» колоний на кровяном агаре готовят мазки, окрашивают по Граму, на капсуле определяют наличие жгутиков в препарате «раздавленная капля*: Н. parasuis неподвижен.

У культур исследуют уреазную активность посевом на среду Заксе. Раствор А: 96%-й этанол — 2 мл и дистиллированная вода — 4 мл. Раствор Б: дистиллированная вода — 100 мл, дигидрофосфат калия — 0,1 г, гидрофосфат калия — 0,12 г, хлорид натрия — 0,5 г, добавляют 1 мл 2 %-го раствора фенолового красного. Смешивают растворы Аи Б в соотношении 1 : 19; смесь разливают по 0,1 мл в уленгутовские пробирки и вносят бактериологическую петлю ис­следуемой культуры. Пробирки выдерживают при 37...38 °С в те­чение 30...40 мин и учитывают результат. В положительном случае раствор за счет расщепления мочевины и зашелачивания среды приобретает малиново-красный цвет. Н. parasuis уреазу не выраба­тывает.

Биопроба. Метод применяют для определения вирулент­ных свойств культур Н. parasuis. Суточной агаровой культурой в дозе 1 ■ I09 микробных клеток заражают внутрибрюшинно морс­ких свинок массой 300...350 г. Наблюдение ведут в течение 5 сут.

Возбудитель актинобациллезной пневмонии свиней. Бактерия {Actinobacieeus pleuropneumoniae), род Actinobacillus, семейство Pasteurellaceae.

Актинобациллезная (гемофилезная) плевропневмония — ин­фекционная болезнь свиней преимущественно 2...3-месячного возраста и откормочных животных. Характеризуется развитием фибринозно-геморрагической некротизируюшей пневмонии и фибринозного плеврита.

Бактериологическое исследование. Включа­ет в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культураль-но-морфологическим, ферментативным и серологическим свой­ствам.

В лабораторию направляют кусочки пораженных легких, сре-достенные и бронхиальные лимфатические узлы.

Микроскопия. Мазки-отпечатки окрашивают по Граму и одним из методов для выявления капсулы. A. pleuropneumoniae — короткие грамотрицательные палочки с закругленными концами, чаше располагаются в виде парных коккобактерий, могут образо­вывать короткие цепочки, нитевидные формы, формируют капсу­лу, спор нет. Возбудитель в исследуемом материале обнаруживают в форме мелких коккобактерий, коротких палочек, окруженных капсулой, расположенных единично, парами, в виде коротких це­почек.

Тема 17. ИЕРСИНИИ

Возбудитель чумы верблюдов и человека ( У. pestis). Принадлежит к роду Yersinia, семейству Enterobacteriaceae.

Чума верблюдов и человека — природно-очаговая болезнь. В естественных условиях резервуаром возбудителя служат грызуны. Здоровых животных заражают переносчики, в первую очередь блохи. Из сельскохозяйственных животных наиболее чувствитель­ны верблюды. Болезнь характеризуется тяжелой интоксикацией, поражением лимфатической системы, легких, тенденцией к сеп­тицемии.

Бактериологическое исследование. Включа­ет в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии (разработаны и другие методы), выделение чистой культуры посевом на питательные среды и методом био­пробы, идентификацию возбудителя по культурально-морфологи­ческим, ферментативным и серологическим свойствам.

В лабораторию направляют органы, трупы грызунов, гной из бубонов, мокроту, кровь. Работа с чумным материалом разрешена только в специализированных лабораториях.

Микроскопия. Мазки окрашивают по Граму. В препара­тах возбудитель обнаруживают в форме овоидной или палочковид­ной клетки размером (0,3...0,5) х(1...3) мкм: располагается одиноч­но, парами, иногда короткими цепочками. Клетки грамотрицатель-ные, часто с биполярной окраской, без жгутиков, спор не образуют.

Выделение и идентификация культуры возбудителя, Возбудитель — факультативный анаэроб, тем­пературный оптимум 28...29Т (диапазон 14...42°С), рН 7,2-7,4, хорошо растет на обычных питательных средах.

Через 24 ч инкубирования при 37 °С на плотных средах образует шероховатые с фестончатым краем и желтовато-коричневым вы­пуклым центром колонии, напоминающие из-за прозрачного фес­тончатого края кружевной платок. В МПБ возбудитель образует пленку на поверхности среды, от которой спускаются нити, напо­минающие сталактиты, на дне пробирки хлопьевидный осадок.

Возбудитель расщепляет глюкозу, мальтозу, маннит, галактозу, арабинозу, ксилозу до кислоты; желатину не разжижает, индол не образует, выделяет каталазу.

При исследовании материала от грызунов необходимо диффе­ренцировать от Y. pseudotuberculosis, который в отличие от Y. pestis образует уреазу и ферментирует рамнозу.

Кроме того, существуют ускоренные методы обнаружения воз­будителя и его антигенов в исследуемом материале: иммунофлуо-ресценция, реакция торможения, пассивная гемагглютинация (РТГА), реакция нарастания титра фага, РДП и др.

Биопроба. Метод применяют для выделения чистой куль­туры из материала, контаминированного посторонней микрофло­рой. Для этого используют морских свинок, которым материал вводят подкожно. Не загрязненный другими бактериями материал вводят внутрибрюшинно. Загнивший нативный материал втирают морским свинкам в предварительно выбритый участок кожи на животе. После гибели (на 3...7-е сутки) проводят вскрытие с пос­ледующим бактериологическим исследованием внутренних орга­нов.

Биопрепараты. Чумная живая сухая вакцина из штам­ма EV.

Химическая чумная вакцина. Чумной бактериофаг.

Возбудитель псевдотуберкулеза (Y. pseudoluberculosis). Бактерия принадлежит к роду Yesrinia, семейству Enterobacteriaceae.

Псевдотуберкулез (родентиоз)— инфекционная болезнь пре­имущественно грызунов и птиц, характеризуется узелковым поражением паренхиматозных органов, сходным с изменениями при туберкулезе.

Бактериологическое исследование. Включа­ет в себя обнаружение возбудителя в исходном материале (прежде всего методом биопробы), выделение чистой культуры посевом на питательные среды и биопробой, идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным, серологичес­ким и патогенным свойствам.