Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии (стр. 34 )

Патогенные свойства. Проявляются при внутри-брюшинном заражении белых мышей и морских свинок.

Возбудитель диплококковой септицемииа {Streptococcus pneumoniae). Вызывает заболевание у молодняка сельскохозяй­ственных животных.

Материал для лабораторного исследова­ния: кровь из сердца, селезёнка, печень, костный мозг, носовые истечения.

Микроскопия. У S.pneumoniae клетки обычно парные, окруженные капсулой, концевые части клеток слегка удлинены. Они также могут располагаться одиночно и в виде коротких цепо­чек. Выделение чистой культуры практикуют методом заражения белых мышей тканевой суспензией внутрибрюшинно.

На глюкозо-кровяном МПА колонии круглые, полупрозрач­ные, плоские, с приподнятым центром и краями, с зоной р-гемо-лиза; в МПБ растет с равномерным помутнением среды. Возбуди­тель обладает гемолитической активностью (цв. рис. IX).

Дифференцируют возбудитель по ферментативной активности, биопробу проводят на белых мышах.

Возбудитель мыта (Streptococcus equl). Мыт — контагиозное за­болевание главным образом молодых лошадей (до двух лет), харак­теризуется катарально-гнойным воспалением слизистой оболочки верхних дыхательных путей, глотки, подчелюстных лимфоузлов.

Для постановки бактериологического диагно­за в лабораторию направляют гной, воспалительный экссудат, истечения из носа. Исследование проводят по общей схеме:

1)  микроскопия препаратов-мазков из поступившего материала;

2)  посев на питательные среды для выделения чистой культуры
возбудителя и ее идентификации; 3) биологическая проба на бе­
лых мышах и котятах.

Мазки готовят тонким слоем, фиксируют, окрашивают по Гра-му и Романовскому — Гимза. Для S. equi характерно расположение длинными цепочками сплющенных кокков. Величина клеток 0,4... 1 мкм. Окрашивается грамположительно. Неподвижен.

Для выделения чистой культуры делают плас­тинчатый посев на сывороточно-глюкозный агар (на обычных средах не растет). Через 24 ч на агаре мытный стрептококк образует мелкие, просвечивающиеся, похожие на капельки росы колонии. Характерно слияние колоний между собой. На свернутой кровяной сыворотке S. equi растет в виде стекловидных сероватых колоний. На кровяном ага­ре рост в виде мелких колоний с зоной fi-гемолиза. В среде Китга — Тароцци, сывороточном бульоне рост проявляется мелкими крупин­ками, выстилающими дно и стенки пробирки, бульон остается про­зрачным. В мазках из бульонной и агаровой культур цепочки стрепто­кокка короткие — из нескольких клеток или даже по два кокка.

Биохимические свойства. Слабо выражены. Мо­локо простое не свертывает, лакмусовое и метиленовое молоко не обесцвечивает (не редуцирует), не сбраживает лактозу, сорбит и маннит. Отсутствие ферментации перечисленных углеводов по­зволяет дифференцировать мытный стрептококк от гноеродного гемолитического стрептококка (S. pyogenes), который сбраживает лактозу, свертывает молоко, редуцирует метиленовую синь.

Для биопробы используют кошек, особенно котят, кото­рые гибнут от ничтожно малой дозы бульонной культуры при под­кожном или внутрибрюшинном заражении в течение З...Юсут. Выделенную чистую культуру можно идентифицировать при по­мощи мытного антивируса, который представляет собой фильтрат 20-суточной бульонной культуры S. equi. В фильтрате мытный стрептококк не растет, а другие виды стрептококков, например S. pyogenes, растут.

При атипичной форме мыта можно применять РСК с мытным антигеном.

Биопрепараты. Вакцину против диплококковой септи­цемии телят, ягнят и поросят готовят из штаммов S.pneumoniae, выделенных от указанных видов животных. Культуры выращива­ют на полужидком агаре, инактивируют 0,4%-м раствором форма­лина, проверяют на стерильность, безвредность (на морских свин­ках), активность (на белых мышах).

Ассоциированная (поливалентная) вакцина против паратифа, пастереллеза и диплококковой септицемии поросят включает в себя кроме P. multocida и S. cholerasuis бактериальную массу S. pneumoniae.

Сыворотку против диплококковой септицемии телят, ягнят и поросят получают гипериммунизацией волов убитыми и живыми культурами возбудителя.

Тема 14.ЭНТЕРОБАКТЕРИИ

Семейство Enterobacteriaceae включает 12 родов бактерий, име­ющих сходство по морфологическим, тинкториальным и культу-ральным свойствам и отличающихся по биохимическим призна­кам. Наиболее важное значение для ветеринарной практики име­ют бактерии родов Escherichia и Salmonella, вызывающие у живот­ных заболевания колибактериоз и сальмонеллез.

Возбудитель колибактериоза (кишечная палочка Escherichia colt). Колибактериоз — остропротекающее инфекционное заболевание молодняка разных видов животных (включая птиц и пушных зве­рей). Заболевание характеризуется, как правило, диареей (профуз-ным поносом), обезвоживанием, депрессией, нарастающей слабо­стью и летальным исходом. Колибактериоз протекает в трех фор­мах: септической, энтеротоксемической и энтеритной. Последние две формы не сопровождаются сепсисом. Восприимчивы телята в первые часы и дни после рождения. Поросята заболевают как в период новорожденное™, так и после отъема. Ягнята заболевают с первых дней после рождения до 5...6-месячного возраста. Птицы поражаются в основном в первые 2...3 мес жизни. Взрослые жи­вотные колибактериозом не болеют, но являются бактерионосите­лями патогенных Е. соН. Кишечная палочка может быть также воз­будителем мастита и эндометрита.

Бактериологическое исследование. В лабо­раторию направляют патологический материал: отрезок кишечни­ка, кусочек печени, селезенки. При вскрытии трупа в лаборатории помимо патматериала исследуют также кровь из сердца и голов­ной мозг. Если в лабораторию не представляется возможным в кратчайший срок доставить материал, его консервируют: фека­лии — раствором стерильного глицерина с NaCl (глицерин — 250 мл, поваренная соль —5 г, дистиллированная вода — 750 мл), кусочки внутренних органов —30%-м водным раствором глице­рина или 10%-м раствором NaCl. При бактериологическом иссле­довании учитывают особенности возбудителя.

Микроскопия. Е. coli — короткие палочки с закруглен­ными краями, грамотрицательные, длиной 1...3мкм и шириной 0,8 мкм, споры не образуют. В мазках расположение одиночное. Бактерии подвижны, перитрихи или неподвижны. Капсулу не об­разуют, за исключением отдельных штаммов серогрупп (08, 09, 0101).

Выделение чистой культуры. Определе­ние культурально-биохимических свойств. Посев производят на среды Эндо (или Левина), МПБ и МПА. По типу дыхания Е. coli •— аэроб. Растет на всех обычных питательных средах. Оптимальная температура 37...38 °С, рН среды 7,0...7,2. На МПА через 18...20ч вырастают влажные круглые колонии с ров­ными краями и гладкой поверхностью. В жидкой среде рост ки­шечной палочки проявляется равномерным помутнением с обра­зованием осадка. Некоторые штаммы Е. coli обладают гемолити­ческими свойствами.

Для дифференциации Е. coli от других представителей семей­ства Enterobacteriaceae определяют ее биохимические свойства. На среде Эндо Е. coli образует три типа колоний: 1) малиновые с ме­таллическим блеском; 2) малиновые с розовым блеском; 3) розо­вые. На среде Левина дает рост в виде колоний темно-фиолетово­го цвета. Глюкозу и лактозу сбраживает с образованием кислоты и газа (некоторые лактозонегативные варианты не сбраживают лак­тозу, сбраживает маннит, дудьцит, арабинозу). Обесцвечивает ме-тиленовую синь в молоке, молоко свертывает, образует индол. Ре­акция с метилротом положительная, проба Фогеса — Проскауэ-ра — отрицательная.

Две последние реакции ставят с двухсуточными культурами на специальной среде Кларка следующего состава: пептон — 5 г, глю­коза — 5 г, К2НРО4 — 5 г, дистиллированная вода — 1000 мл. Сре­ду стерилизуют текучим паром или автоклавируют при 50 кПа в течение 15 мин. В одну пробирку с культурой после инкубирова­ния в данной среде пипеткой добавляют 5 капель индикатора ме-тилрота (метилрот — 0,01 мл, 96%-й спирт-ректификат — 30 мл, дистиллированная вода — 20 мл), после чего пробирки встряхива­ют. Розово-красное окрашивание учитывают как положительный результат, желтое окрашивание — как отрицательный, что связано с изменением рН культуры вследствие ферментации глюкозы. В другую пробирку с культурой в среде Кларка добавляют 0,2 мл 40%-го раствора КОН и 0,5 мл 6%-го спиртового раствора а-на-фтола. Учет производят через З...5мин. При положительном ре­зультате появляется розовое окрашивание вследствие реакции ин­дикатора и образовавшегося в среде ацетил метилкарбинола при расщеплении глюкозы. При отрицательном результате — желтое окрашивание.

На средах Козера (жидкая) и Симмонса (агаровая с индикатором бромтимолблау) Е. coli не растет, так как не усваивает цитратно-ам-монийные соли. Среда Козера синтетическая бесцветная, состоит из кислого фосфата натрий-аммония (NaNH4HPO4- 4Н2О) — 1,5 г, однозамещенного фосфата калия (КН2РО4) — 1 г, сульфата магния (MgSO4H2O)-0,2r, цитрата натрия (Na3C6H5O7 ■ 2Н2О) - 3 г, дистиллированной воды — 1000 мл. Раствор этой смеси пропуска­ют через бумажный фильтр, разливают по пробиркам, стерилизу­ют при 120 °С в течение 15...20 мин. Помутнение среды после двухсуточного культивирования в термостате указывает на рост бактерий; при отсутствии роста бактерий среда остается без изме­нений. На среде Симмонса цитрато-аммонийнопозитивные бак­терии растут с изменением цвета среды в ярко-синий. Микроорга­низмы, не усваивающие цитратные и аммонийные соли, на среде Симмонса не растут: цвет ее не изменяется.

Основываясь на морфологических и культурально-биохими-ческих свойствах, проводят межродовую дифференциацию. Но биологические свойства бактерий разных штаммов одного и того же вида могут быть неодинаковыми, что объясняется их различной вирулентностью и антигенной структурой, установ­ление которых входит в комплекс микробиологических диагно­стических исследований. Выделенную чистую культуру типиру-ют в РА, используя типоспецифические агглютинирующие коли-сыворотки.