Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии (стр. 53 )

Тема 5. Цель занятия: ознакомить студентов с типами питатель­ных сред, методами их составления и культивирования микроор­ганизмов; освоить технику посева микроорганизмов на плотные и жидкие питательные среды и методы выделения чистых бактери­альных культур; ознакомить студентов с основными культураль-ными характеристиками микроорганизмов и методами определе­ния количества бактерий.

Оборудование и материалы: агар-агар, пептон, желатина, мясная вода, перевар Хоттингера, МПА, МПБ, среды (Китта — Тароцци, Эндо, Левина, Вильсона — Блера, Гисса), сухие питательные сре­ды, кровяной МПА; потенциометр, индикаторные бумажки, сте­рильная дефибринированная кровь барана, термостат, анаэростат. Бульонные и агаровые культуры В. cereus, Е. coli и S. aureus в про­бирках, чашках Петри; солевой МПА (8 % хлорида натрия) в чаш­ках Петри, стеклянные шпатели, стерильные пипетки Пастера, бактериологические петли.

Тема 6. Цель занятия: ознакомить студентов с методами изуче­ния ферментативной активности и принципами идентификации микроорганизмов.

Оборудование и материалы: засеянные среды Гисса (глюкоза, лактоза, сахароза и т. д.) с признаками кислото - и газообразова­ния, культуры Е. colt на МПБ в пробирках, реактив Эрлиха, куль­туры D. subtilis на молоке, МПЖ, культуры S. aureus на МПА в пробирках, 3%-й раствор пероксида водорода и другие тесты; ре­зультаты определения ферментативной активности культур Е. coli и S. typhimurium на ПБДЗ-пластинах, карточки с описанием свойств отдельных видов бактерий для работы с определителями.

Тема 7. Цель занятия, ознакомить студентов с методами опреде­ления чувствительности микроорганизмов к антибиотикам, а так­же с действием бактериофагов и их практическим использовани­ем.

Оборудование и материалы: стерильные чашки Петри с МПА, пробирки с чистой культурой стафилококка и кишечной палочки, стерильные градуированные «концевые» пипетки на 2 мл, резино­вые груши, набор стандартных дисков с разными антибиотиками, стерильные пинцеты, линейки; культура вакцинного штамма L. monocytogenes, набор листериозных бактериофагов; стерильный МПБ, содержащий 0,5 % глюкозы; 2%-й МПА в чашках Петри, стерильные пипетки Пастера, лечебно-профилактический бакте­риофаг против паратифа и колибактериоза телят; чувствительная к фагу культура Е. coli.

Тема 8. Цель занятия: ознакомить студентов с основными мето­дами и показателями санитарно-микробиологической оценки со­стояния объектов окружающей среды.

Оборудование и материалы: прибор для подсчета колоний; кол­бы с пробами воды, почвы, молока, пробы мяса и мясных изде­лий; бактериологические пробирки с 9 мл воды, пробирки с 10 мл расплавленного агара, мерные стерильные пипетки (2 мл), сте­рильные чашки Петри, чашки Петри с МПА, чашки Петри с кро­вяным МПА, навески почвы, стерильная водопроводная вода в колбе (200 мл), пробирки со средами Кесслера, Вильсона — Блера.

Тема 9. Цель занятия: ознакомить студентов с фенотипической и генотипической изменчивостью, генетическими методами иден­тификации микроорганизмов.

Оборудование и материалы', культура Proteus vulgaris; пробирки с 2%-м МПА; 1%-й раствор фенола; пробирки с 10 мл и с 1мл МПБ; чашки Петри с 3%-м МПА, содержащим 100 ЕД стрептоми­цина в 2 мл среды; чашки Петри с обычным МПА; стерильные мерные пипетки (1 мл); диссоциирующая культура Е. coli или P. miitocida на МПА в чашках Петри в виде изолированных коло­ний; бинокулярная лупа МБС-1; культура Е. coli, продуцирующая колицин, и колицинчувствительная культура Е. coli; чашки Петри с 1,5%-м МПА; хлороформ, пробирки с 0,7%-м МПА; штаммы Е. coli K12F", leir, E. coli К12 Hfr, leu+, str, E. coli lac; трансдуциру-ющий фаг 1 dgal, содержащий р-галактозидазный оперон Е. coli; набор компонентов для ПЦР-диагностики какой-либо инфекци­онной болезни, амплификатор.

Тема 10. Цель занятия: ознакомить студентов с методами оцен­ки иммунного статуса организма, реакциями агглютинации (РА), гемагглютинации (РГА) и реакцией Кумбса, с техникой их поста­новки и учета результатов; с сущностью и техникой постановки реакций кольцепреципитации, диффузионной преципитации (РДТ), методом иммуноэлектрофореза; рассмотреть их практичес­кое использование; ознакомить студентов с принципом метода флуоресцирующих антител и техникой постановки реакции имму-нофлуоресценции, с принципом и техникой проведения иммуно-ферментного анализа, с реакцией нейтрализации (РН); освоить технику постановки РН для обнаружения и идентификации бак­териальных токсинов; ознакомить с методами тестирования фак­торов неспецифической резистентности и методами оценки им­мунного статуса животного организма; дать общее представление о сущности иммуноферментного метода; ознакомиться с компо­нентами и оборудованием для проведения этого метода; освоить технику постановки иммуноферментного метода.

Оборудование и материалы, культуры Е. coli различной серогруп-повой принадлежности на МПА, О-агглютинирующие диагности­ческие эшерохиозные сыворотки, бруцеллезный розбенгал антиген, положительная бруцеллезная сыворотка, планшеты с результатами титрования иммунной сыворотки в РИГА, единый бруцеллезный антиген, мерные пипетки; инактивированные культуры бруцелл и сальмонелл, 96%-й этанол; ФСФБ (рН 7,7...8,4), «влажная камера» (чашки Петри, эксикатор), люминесцирующие сыворотки против бруцелл, сальмонелл, иммуноглобулинов кролика, позитивная бру­целлезная сыворотка, готовый препарат для демонстрации резуль­татов ИФА, люминесцентный микроскоп; сибиреязвенная преци-питирующая сыворотка, стандартный сибиреязвенный антиген, стерильный физиологический раствор, пипетки Пастера, пробирки Уленгута, 1,5%-й агаровый гель с мертиолатом (конечное разведе­ние 1: 10 000), стериальные чашки Петри, камера для иммуноэлек-трофореза, готовые иммунофореграммы, штаммы для РДП; буль­онные токсинсодержащие культуры С. perfringens, центрифуга, цен­трифужные пробирки, стерильные бактериологические пробирки, стерильный физиологический раствор, воронки, ватно-марлевые фильтры, стерилизатор со шприцами и инъекционными иглами, диагностические антитоксические сыворотки С.perfringens, белые мыши массой 16... 18 г; культура Е. соНна МПА, стерильный МПБ, стерилизатор, шприцы и иглы, спирто-водный раствор метилено-вой сини, нормальная и иммунная (противоэшерихиозная) кроли­чьи сыворотки, стерильные пастеровские пипетки, 1%-й агар Диф-ко, ацетоновый порошок М. lysodeicticus (или культура), стерильные чашки Петри, кристаллический лизоцим, фосфатно-солевой бу­ферный раствор (рН 7,2...7,4), эритроциты барана, стерильный фи­зиологический раствор, веронал-мединаловый буферный раствор (рН 7,3...7,4), гемолизин, комплемент морской свинки, дистилли­рованная вода, фотоэлектроколориметр, пластины с результатами радиальной иммунодиффузии по определению иммуноглобулинов разных классов в сыворотке крови, калибровочная кривая для оп­ределения содержания иммуноглобулинов разных классов; имму; нологический планшет, специфические сыворотки или иммуногло­булины, термостат, фосфатный буфер (рН 7,2...7,4) с твин-20, спе­цифический антиген (для контроля — неспецифический антиген), шприц-дозатор, пероксидазный антивидовой конъюгат (антивидо­вая меченая сыворотка), субстратная смесь (индикатор ортофецил-диамин с 3%-м раствором пероксида водорода); препараты для под­счета Е-РОК и ЕАС-РОК.

Тема 11. Цель занятия: ознакомить студентов с общими правила­ми отбора, консервирования, транспортировки и хранения матери­алов для микробиологического исследования, а также этапами мик­робиологического исследования; освоить технику заражения лабо­раторных животных, цели и правила бактериологического исследо­вания, методы определения вирулентности микроорганизмов и тестирования факторов патогенности бактерий.

Оборудование и материалы: кролик; иглы для взятия крови, центрифужные пробирки, центрифуги, 96%-й этанол, ватные там­поны, глицерин, физиологический раствор, лед, поваренная соль, термос, термометр; труп животного (кролик, морская свинка), кюветы с парафином или доски для вскрытия животных, пинце­ты, ножницы, склянки для патологического материала; схемы бактериологического исследования при диагностике болезней бактериальной этиологии (бруцеллез, стафилококкоз и др.); кро­вяной МПА в чашках Петри; стерильная плазма кролика (челове­ка); культуры Е. coli, трупы мышей, зараженных Е. coli; белые мыши, морские свинки, кролики, стерильные шприцы, иглы, фи­зиологический раствор.

Тема 12. Цель занятия: ознакомить студентов с вакцинами раз­личных типов, лечебно-профилактическими и диагностическими иммунными сыворотками, антигенами, аллергенами и принципа­ми их контроля.

Оборудование и материалы: вакцины (против рожи свиней из штамма ВР-2, против сальмонеллеза из штамма ТС-177, против лептоспироза, ботулизма, пастереллеза), лечебно-профилактичес­кие иммунные сыворотки (против пастереллеза, рожи свиней), диагностические агглютинирующие и флуоресцирующие сальмо-неллезные сыворотки, диагностические аллергены (бруцеллин, туберкулин, маллеин), стерильные МПА, МПБ, среда Китта — Тароцци в пробирках, агар Сабуро; стерильные пипетки Пастера, масло, люминесцентный микроскоп; сенсибилизированные бру-целлами морские свинки с положительной реакцией ГЗТ.

Тема 13. Цель занятия: ознакомить студентов с этапами лабора­торной диагностики, основными свойствами возбудителей стафи-лококкозов, стрептококкозов и биопрепаратами.

Оборудование и материалы: культуры S. aureus и S. saprophyticus на МПА, кровяном МПА, в МПБ; результаты тестов по определению патогенных свойств стафилококков: ферментация маната, плазмоко-агулазная, гемолитическая, лицитиназная, ДНК-азная, желатиназ-ная активность культуры S. pneumoniae, S. agalactiae (или S. pyogenes) на глюкозо-сывороточном МПА, МПБ, на средах Гисса с углевода­ми; пипетки Пастера; стерильные МПБ и кровяной МПА; красители для окраски по Граму и на капсулы; биопрепараты.