Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии (стр. 39 )

В лабораторию направляют паренхиматозные органы, лимфа­тические узлы, трупы грызунов и птиц.

По морфологии и тинкториальным свойствам Y. pseudo-tuberculosis практически неотличим от Y. pestis.

Культурально-биохимические свойства. У. pseudotuberculosis — факультативный анаэроб; температурный оптимум 28...30 °С, рН 7,2...7,4. Свойства возбудителя варьируют в зависимости от температурного режима культивирования. К пита­тельным средам нетребователен.

На плотных средах при 22...28 °С через 24 ч образует мелкие (диаметр 0,1...0,5 мм), круглые, выпуклые, прозрачные, серовато-желтоватые, блестящие колонии с приподнятым центром. При 37 °С может проявляться полиморфизм колоний, связанный с формированием Д-колоний, выпуклых, с коричневатым центром и волокнистыми истонченными краями. При низких температу­рах (22 °С и ниже) образует жгутики, чем отличается от Y. pestis, при 37 °С неподвижен. В МПБ растет с равномерным помутнени­ем среды и последующим выпадением хлопьевидного или вязкого осадка.

С целью видовой идентификации исследуют ферментатив­ные свойства. У. pseudotuberculosis образует уреазу, расщепляет рамнозу, мелибиозу, не обладает лизин-орнитиндекарбоксила-зами, не гидролизует желатин, не образует индол, не утилизи­рует цитрат Симмонса. Реакцию Фогеса—Проскауера при 25 °С отрицательная.

Для серовариантной идентификации выделенных культур воз­будителя применяют серологические реакции. Y. pseudotuberculosis подразделяют на 6 серологических групп по термостабильным ан­тигенам и 5 вариантов — по жгутиковым антигенам.

Биопроба. Тканевым гомогенатом или выделенной куль­турой заражают подкожно или внутрибрюшинно белых мышей, морских свинок, кроликов. Мыши погибают через 2...4 сут, мор­ские свинки и кролики — через 2...35 сут в зависимости от виру­лентности культуры. Из органов павших подопытных животных делают посевы на питательные среды для выделения культуры возбудителя, готовят и микроскопируют окрашенные мазки и от­печатки.

Тема 18. ВОЗБУДИТЕЛИ РОЖИ И ЛИСТЕРИОЗА

Возбудитель рожи свиней {Erysipelothrix rhusiopathiae). Открыт Па-стером и Тюйе (1882). Принадлежит к семейству Corynebacteria-сеае, роду Erysipelothrix. Заболевание у свиней отмечают в возрасте от 3 мес до! года, у ягнят — старше 3...4 нед. Другие виды живот­ных болеют редко. К возбудителю восприимчив и человек. Рожа свиней протекает в септической форме, внешне проявляется обра­зованием красных пятен на коже (крапивница), лихорадкой.

Бактериологическое исслед о в а н и е. Патоло­гическим материалом служит труп животного или кусочки орга­нов—печени с желчным пузырем, селезенки, почки, трубчатая кость. При подозрении на хроническую форму исследуют кровь из сердца и эндокарда, а при наличии артритов — суставную жид­кость. Кусочки органов консервируют в 30...40 %-м водном ра­створе глицерина или насыщенном растворе поваренной соли. Трубчатую кость, очищенную от мягких тканей, обертывают мар­лей, пропитанной 2...3 %-м раствором фенола.

Препараты-отпечатки из патологического материала окраши­вают по Граму. Для люминесцентной микроскопии из паренхима­тозных органов готовят суспензию (взвесь растертой ткани) на физиологическом растворе NaCl. Тонкие мазки из этой суспензии красят флуоресцирующей сывороткой. Пастеровской пипеткой делают посев на МПБ, МПА, МПЖ; инкубируют при 37 °С. Вы­росшую в бульоне культуру исследуют на подвижность и исполь­зуют для определения биохимических свойств. Смыв агаровой культуры применяют в качестве антигена для РА. Суспензией из тканей органов заражают голубя или белую мышь. Павших живот­ных вскрывают и исследуют бактериологически (рис. 62).

Морфология. Бактерия рожи свиней — тонкая прямая или слегка изогнутая палочка длиной 2...2,5 мкм. Бактерии распо­лагаются одиночно, попарно или в виде скоплений. При хрони­ческом течении болезни в мазках с пораженных сердечных клапа­нов (эндокарда) или других органов возбудитель имеет вид длин­ных нитей, иногда переплетающихся, но не ветвящихся. По Граму окрашивается положительно, споры и капсулы не образует. Не­подвижен.

При люминесцентной микроскопии возбудителя рожи опреде­ляют по наличию специфического свечения морфологически ти­пичных микробных клеток интенсивностью не ниже чем на три креста. При сомнительном или отрицательном результате диагноз уточняют люминесцентной микроскопией выросших на средах культур, выделенных из патологического материала.

Культурально-биохимические свойства. Возбудитель рожи неприхотлив к питательным средам. Для опти­мальных условий роста нужны среды, содержащие 1 ...2 % глюкозы или кровяную сыворотку с рН 7,2...7,6; температура культивирования 37 °С. Бактерии — аэробы или факультативные анаэробы. В жидкой питательной среде через 24...48 ч образуется едва заметное помутнение, незначительный осадок, который при встряхивании напоминает муаровую ткань (ленту).

На МПА возбудитель растет в виде очень мелких росинчатых прозрачных колоний. Типичной является гладкая колония с ров­ными краями, но встречаются измененные О - и R-формы, осо­бенно при хроническом течении болезни. Для патогенных штам­мов характерна S-форма колоний. В МПЖ по уколу посева через несколько дней появляется рост в виде «ершика» без разжижения среды.

Пышный рост наблюдают в полужидком агаре (0,1...0,15 %). Элективной средой для выделения рожистого микроба служит среда Сент-Иваньи. Полученную культуру микроскопируют как в обыч­ном световом микроскопе, так и люминесцентным методом, иденти­фицируют по культурально-биохимическим свойствам, пластинча­тым методом РА с позитивной сывороткой в разведении 1: 50.

Бактерия рожи свиней обладает слабовыраженной биохими­ческой активностью — не сбраживает салицин, не образует ката-лазы. С образованием кислоты и газа сбраживает глюкозу, лакто­зу, галактозу. Образует сероводород. По антигенной структуре бактерии рожи свиней относят к трем серологическим типам: А, В и N. Серотип N обладает общим видовым антигеном, серотипы А и В отличаются своими гаптенами. На основании серологических исследований (РА, РП, РГА) штамм бактерии рожи свиней отно­сят либо к серотипу А (более вирулентному), либо к менее виру­лентному для свиней серотипу В, обладающему выраженными иммуногенными свойствами.

Патоген н ость. Определяют заражением выделенной культуры возбудителя голубей и белых мышей. Голубей заражают внутримышечно (чаще в грудную мышцу) в дозе 0,2...0,3 мл, ги­бель наступает через З...6сут; белых мышей — подкожно в дозе 0,2 мл, гибель наступает через 2...4сут. Наблюдение за заражен­ными животными ведут 6...7сут. При заражении белых мышей следует исключить Erysipelothrix murisepticum — возбудителя сеп­тицемии мышей, по морфологическим и культуральным свой­ствам сходного с бактериями рожи свиней. Е. murisepticum непа­тогенна для голубей. При бактериологических исследованиях на рожу свиней следует учитывать возможность обнаружения возбу­дителя листериоза, имеющего морфологические, тинкториаль-ные и культуральные свойства, сходные со свойствами бактерии рожи свиней.

Биопрепараты. Концентрированная гидрокидалюми-ниевая формолвакцина против рожи свиней: содержит возбуди­теля серовара В, выращенного в бульоне Хоттингера, инактиви-рованного формалином, сорбированного на гидроксиде алюми­ния.

Депонированная вакцина против рожи свиней представляет собой живую культуру матрикса Конева, сорбированную на гид­роксиде алюминия.

Сухая живая вакцина против рожи свиней ВГНКИ из штамма ВР-2 представляет собой лиофильно высушенную культуру вак­цинного штамма ВР-2.

Лечебно-профилактическая сыворотка против рожи свиней: получают гипериммунизадией свиней; контролируют на стериль­ность, безвредность и активность на белых мышах и признают ак­тивной, если она предохраняет от гибели мышей в дозах 0,01...0,02 и 0,03 мл.

Сухие рожистые люминесцирующие сыворотки для прямого метода иммунофлуоресценции: предназначены для серологичес­кой идентификации возбудителя непосредственно в материале и в культуре.

Возбудитель листериоза (Listeria monocytogenes). Возбудитель от­крыт Марреем (1926). Назван в 1940 г. в честь Листера. Принадлежит к семейству Corynebacteriaceae, роду Listeria. Вызывает заболе­вание грызунов, свиней, крупного и мелкого рогатого скота, ло­шадей, некоторых видов пушных зверей, птицы. Восприимчив к листериозу и человек. Болезнь протекает в септической форме, но нередко характеризуется проявлением расстройства центральной нервной системы.

Лабораторная диагностика листериоза осуществляется, как правило, бактериологическими и серологическими методами.

Бактериологическое исследование. В лабо­раторию посылают свежий труп мелкого животного целиком. От трупов крупных животных (лошадь, крупный рогатый скот, овца) — головной мозг и кусочки паренхиматозных органов, а в случае аборта — абортированный плод или его органы. При нали­чии мастита пробы молока берут из пораженных долей вымени.

Бактериологическое исследование включает в себя микроско­пию мазков-отпечатков, окрашенных по Граму, и люминесцент­ную микроскопию с применением флуоресцирующей сыворотки. Посевы для выделения культуры производят из всех присланных тканей и органов на МПА, МПБ, МППБ, МППАс 1 % глюкозы и 2...3 % глицерина, переваром Мартена. Заражают морских свинок, белых мышей, голубей.

Морфология. Возбудитель — мелкая полиморфная па­лочка длиной 0,5...2,0 мкм. Хорошо окрашивается всеми анилино­выми красками. Грамположительна, подвижна, споры и капсулы не образует.

Культуральные свойства. Аэроб или факультатив­ный анаэроб; оптимальные рН 7,2..,7,4, температура 37 °С. Рост отмечают через 24...48 ч. В жидкой среде рост характеризуется едва заметным помутнением с образованием слизистого осадка. На плотных средах образуются мельчайшие росинчатые колонии. На кровяном агаре вокруг колоний узкая зона гемолиза. Типич­ные колонии на плотных средах пересевают для получения чистой культуры.

Биохимическую активность культуры изучают на средах с угле­водами. Возбудитель листериоза сбраживает с образованием кис­лоты без газа глюкозу, рамнозу и салицин. Не сбраживает дуль-цит, инулин, сорбит. Индикаторные среды с лакмусом, метилро-том обесцвечивает.