Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии (стр. 42 )

Особое практическое значение реакция преципитации имеет при исследовании кожевенно-мехового сырья на сибирскую язву. Кусочки проб данного сырья доставляют в лабораторию в герме­тической упаковке. Пробы сразу обеззараживают автоклавирова-нием, измельчают, экстрагируют «холодным способом» при 12...14°С в физиологическом растворе (1: 10) в течение 16...18 ч. Экстракт фильтруют через нейтральную асбестовую вату. Поста­новка реакции осуществляется, как указано выше.

Из мокросоленого сырья предварительно (после автоклавиро-вания) удаляют соль (диализ). Для этого полученные экстракты фильтруют, разливают в коллодийные мешочки и помещают на 45...60 мин в кристаллизатор с дистиллированной водой. После диализа мешочки переносят на! ч в кристаллизатор с 1 %-м ра­створом NaCl, а затем ставят реакцию, как обычно.

Биопрепараты. Вакцина СТИ — живая вакцина из эта­лонного штамма, представляет собой споровую (95...100 %) агаро­вую культуру в виде суспензии в 30%-м стерильном растворе гли­церина; содержит (2Д...З,5)107 жизнеспособных спор в 1 мл.

Вакцина ГНКИ — сухая живая вакцина из эталонного штамма ГНКИ: содержит 5-107 жизнеспособных спор в 1мл. Вакцина против сибирской язвы из штамма № 55.

Ассоциированная живая жидкая вакцина против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота.

Лечебно-профилактическая сибиреязвенная сыворотка: полу­чают гипериммунизацией лошадей инактивированной сибиреяз­венной культурой.

Сибиреязвенная преципитирующая сыворотка: предназначена для исследования материала на сибирскую язву в реакции преци­питации. Сыворотку получают гипериммунизацией лошадей.

Сибиреязвенный стандартный антиген для РП: выпускают для контроля активности преципитируюшей сыворотки. Пред­ставляет собой экстракт из инактивированной бактериальной массы В. anthracis.

Сибиреязвенные люминесцирующие сыворотки: готовят из си­биреязвенной преципитируюшей сыворотки. Предназначены для ускоренного обнаружения некапсулированных клеток возбудите­ля в первичных посевах.

Сибиреязвенные диагностические бактериофаги: представляют собой освобожденную от бактерий путем фильтрования жидкость бульонной культуры возбудителя, зараженную бактериофагом. Титр бактериофага 10.

Тема 21. ПАТОГЕННЫЕ АНАЭРОБЫ

Патогенные анаэробы (за исключением возбудителя некробак-териоза) принадлежат к порядку Eubacteriales, семейству Bacillaceae, роду Clostridium. Для получения культур анаэробов применяют специальные жидкие и плотные питательные среды: Китта — Тароции, Вильсона — Блера, глюкозо-кровяной агар, мо­локо, желатину, среды с углеводами и индикатором, сывороточ1 ные среды, мартеновский бульон и агар.

Возбудители злокачественного отека (Clostridium perfringens, С. septicum, С. novyi, С. histolyticum). Заболевание полимикробной этиологии, развивается вследствие инфицирования раневой по­верхности микробами данной группы.

Патологический материал. Для диагностики ис­пользуют воспалительный экссудат и кусочки пораженной ткани из очага воспаления. Если материал нельзя быстро доставить в ла­бораторию, его консервируют в 40 %-м водном растворе глицери­на или же полоски пораженной ткани в марлевом мешочке (защи­та от мух) высушивают на воздухе.

Перед исследованием материал растирают в ступке с добавле­нием физраствора, а затем пастеровской пипеткой высевают в среду Китта — Тароцци, Вильсона — Блера. Выросшие колонии на плотной среде пересевают в молоко, среды с углеводами (рис.64). Культуры в среде Китта — Тароцци пересевают на кро­вяной агар, с которого типичные колонии вновь пересевают в жидкую печеночную среду. Препараты-мазки готовят из исследуе­мого материала и колоний полученных культур, окрашивают по Граму. Для биопробы лучше использовать чистую культуру каждо­го выделенного возбудителя. Видовую принадлежность выделяе­мых вышеназванных микробов определяют в соответствии с ха­рактеристикой каждого из них.

С. perfringens (С. welchii) открыт Уелчем и Нетталем (1892). Это крупная (4...8 мкм) полиморфная палочка с закругленными концами. Неподвижная, грамположительная. В объектах окружающей среды находится в споровой форме. При культивировании споры образуются в средах, бедных углеводами и богатых белками. В ин­фицированном организме образует капсулу. В жидких питатель­ных средах вызывает равномерное помутнение бульона с обиль­ным образованием газа вследствие разложения углеводов; затем микробная масса оседает на дно пробирки, а среда просветляется. На кровяном агаре колонии круглые, выпуклые, сочные, с ровны­ми краями зеленого (оливкового) цвета, с обширной зоной гемо­лиза. На среде Вильсона — Блера {и на мозговой среде) С. perfringens образует черные колонии. Чистую культуру микроба за­севают в молоко, желатину (столбиком) и среды с углеводами. По­севы помешают в микроанаэростат и выдерживают 16...18 ч в тер­мостате при 37 °С.

В молоке рост микроба сопровождается сильным газообразова­нием и формированием губчатого (ноздреватого) сгустка казеина. Желатину разжижает медленно; лактозу, сахарозу, мальтозу и крахмал ферментирует с образованием кислоты и газа/ Для био­пробы внутримышечно заражают морских свинок или голубей, кроликов и белых мышей: гибель через 16...24 ч. Под влиянием

бактериофага, излучения Рентгена и антибиотиков C.perfringens утрачивает патогенность.

С. perfringens продуцирует сложный токсин, обладающий ле­тальным, некротизирующим и гемотоксическим действием. По антигенной структуре различают шесть типов токсинов: А, В, С, D, Е и F. Токсин типа А нейтрализуется та поспе пифической ан­титоксической сывороткой; данный тип является участником ас­социации возбудителей злокачественного отека (и газовой гангре­ны). Тип В имеет второе название Lambdysentery-Bacillus; (L-D-Bacillus): его токсин нейтрализуется также типоспецифической сывороткой, но эта же сыворотка нейтрализует и токсин типа А. L-D-Bacillus вызывает дизентерию у ягнят в первые дни жизни. Токсин типа С нейтрализуется специфической антитоксической сывороткой. Является также возбудителем брадзота овец. Токсин типа D {другое название В. ovitoxicus) вызывает энтеротоксемию овей, нейтрализуется антитоксином типа D. Тип Е может быть возбудителем инфекции у телят, а тип F — язвенного энтерита у овец.

При злокачественном отеке наиболее часто выделяют С. septicum. Этиологическую роль его при злокачественном отеке ус­тановил Кох (1881). Это полиморфная палочка величиной 3...8 мкм, в диаметре 0,6...0,8 мкм. Располагается в виде длинных нитей как в инфицированном макроорганизме (особенно на се­розных поверхностях внутренних органов), так и на питательных средах. Подвижная, перитрих. Окрашивается грамположительно. Образует центрально расположенную спору как в организме, так и вне его. Оптимальная температура 37 "С, рН 7,6.

На среде Китта — Тароцци отмечают равномерное помутнение среды с обильным газообразованием. Затем бациллы оседают на дно пробирки и среда просветляется. На глюкозо-кровяном агаре появляется характерный рост в виде кружевного узорчатого спле­тения с большой зоной гемолиза. Медленно разжижает желатину, выделяет сероводород и аммиак. Интенсивно ферментирует с об­разованием кислоты и газа глюкозу, лактозу и салицин. Мед­ленно свертывает молоко. Продуцирует токсины, обладающие не­кротизирующим, летальным, гемотоксическим действием, и фер­менты: коллагеназу и гиалуронидазу. Нередко вызывает брадзот у овец. В лабораторных условиях для биологической пробы лучше использовать морских свинок, которые при внутрибрюшинном заражении погибают через 16...20 ч.

С. novyl — это крупная грамположительная полиморфная па­лочка с закругленными концами длиной 5... 14 мкм. Располагается одиночно и в виде коротких цепочек (цв. рис. XI). Окрашивается грамположительно. Образует спору, расположенную субтерми­нально. Строгий анаэроб. Оптимальная температура роста 35...38 °С, рН 7,8. Хорошо растет в среде Китта — Тароцци, обра­зует равномерное помутнение. На глкжозно - кровяном агаре образуются шероховатые колонии с неровными краями в виде бахром­ки, вокруг которых небольшая зона гемолиза. Медленно разжижа­ет желатину, вызывая ее почернение. Молоко свертывает с обра­зованием мелких хлопьев казеина. Ферментирует с образованием кислоты и газа глюкозу, глицерин.

С. novyi продуцирует сильнодействующий экзотоксин. При введении лабораторным животным (кролику, морской свинке, го­лубю) на месте инъекции образуется студенистый экссудат (отек). В естественных условиях помимо злокачественного отека вызыва­ет брадзотоподобное заболевание с геморрагическими поражения­ми слизистой сычуга, кишечника, некротическими поражениями печени и скоплением газа в желудочно-кишечном тракте.

Разновидности данного вида микроба могут быть причиной ос­теомиелита у буйволов.

С. histolyticum — это грамположительный палочковидный под­вижный микроб. Образует спору. Продуцирует протеолитичес-кий фермент, который обусловливает расплавление тканей ин­фицированного организма. Длина микробной клетки 2...5мкм. На кровяном агаре растет в виде мелких росинчатых гладких ко­лоний без зоны гемолиза. Молоко пептонизирует. Сахаролити-ческими свойствами не обладает. Патогенен для всех лаборатор­ных животных. При заражении животных на месте инъекции об­разуется язва.

Возбудитель дизентерии ягнят

(С/, perfringens тип В (L-D-Bacilius). Вызывает остропротекающее заболевание у ягнят в пер­вые дни после рождения. В лабораторию посылают кишечное со­держимое. Порядок и методика исследования такие же, как при злокачественном отеке. Для установления типовой принадлежно­сти ставят пробу нейтрализации токсина молодой культуры С. perfringens типовой антитоксической сывороткой.

Возбудитель брадзота овец

(С. perfringens типа С, С. septicam, С. novyL). Анаэробные клостридии. Брадзот —остропротекаю­щее септическое заболевание овец, характеризующееся судо­рожными явлениями и высокой смертностью. Характеристика названных микробов изложена выше. Обнаружение возбудите­лей служит основанием для установления диагноза. В лаборато­рию направляют кровь из сердца, слизистую оболочку сычуга, тонкого отдела кишечника, инфильтрат подкожной клетчатки, некротические очаги в печени. Порядок и методика исследова­ния такие же, как при диагностике злокачественного отека и дизентерии ягнят. Выделенную чистую культуру идентифици­руют по характерным морфологическим и культурально-биохи-мическим свойствам.