Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии (стр. 9 )

Актиномицеты (лучистые грибы). Это одноклеточные раститель­ные организмы, совмещающие в себе признаки бактерий и низ­ших грибов. Гифы мицелия актиномицетов лучезарно разрастают

Рис. 25. Цвкл раиитня возбудителя спорыньи Claviceps purpuretr.

/ — проросший склероций с головчатыми стропами; 2—перитеций; 3 —

аск; 4 — головчатая строма в разрезе; 5—гифы с конидиями; 6 —колос

ржи с рожками спорыньи

ся по субстрату (откуда и название лучистые), что сближает их с грибами. Толщина гиф не превышает толщину бактерий, поэтому их также рассматривают под иммерсионной системой микроско­па.

Мицелий субстратный и воздушный. Вначале образуется суб­стратный, а затем воздушный мицелий, придающий колонии бар­хатистый вид. Колонии актиномицетов плотной консистенции, прочно сросшиеся с питательной средой, поэтому извлекаются вместе с субстратом. Актйномицеты образуют пигмент и бывают окрашены в разные цвета: розовый, красный, бурый, черный и др. Вид актиномицетов определяют по строению воздушного мице­лия. От мицелия отходят спорангиеносцы со спорами на концах (органы плодоношения). Актйномицеты — аэробы, растут на крахмально-аммиачном агаре при 30...35 °С.

Приготовление препарата. Культуру гриба, выра­щенную на плотной питательной среде, извлекают препароваль­ной иглой или упругой петлей, наносят на предметное стекло и накрывают таким же стеклом. Раздавливают, разъединяют стекла вдоль поверхности, в результате чего получается два мазка. Куль­туру, выращенную на жидкой питательной среде, наносят на предметное стекло петлей. Фиксированный мазок окрашивают фуксином Пфейффера.

Микроскопическая картина: тонкие разветвленные нити (гифы), расположенные пучками или тяжами.

Дрожжи. Это безмицелиальные одноклеточные почкующиеся грибы, принадлежащие к классу аскомицетов. Форма клеток раз­ная, но чаще овальная, круглая или лимо но подобная.

Рис. 26. Форма дрожжей, типы образования асков, мицелия и почкования:

I— Endomycopsis (эски, мицелии, почкование); 2 — Saccharomyces (аски, почкование); 3-Candida (мицелий, почкование); 4— Torutopsis (почкование)

Клетки дрожжей имеют оболочку, цитоплазму и, в отличие от прокариотов, оформленное ядро, которое хорошо видно в неокра­шенном препарате. Цитоплазма молодых клеток более однородна: с течением времени появляются вакуоли. Дрожжи крупнее бакте­риальных клеток, их диаметр колеблется от 10 до 15 мкм. Внутри клеток дрожжей образуются споры (от 4 до 12), после чего они становятся сумками (асками). Различают еще артроспоры, или по­коящиеся клетки дрожжей. Они отличаются от вегетативных форм наличием двухконтурной оболочки, большим количеством запасных питательных веществ (гликогена, жира) и отсутствием вакуолей. Размножение дрожжей происходит почкованием, спо­рами и половым путем (копуляцией) (рис. 26).

Приготовление препарата. Каплю культуры дрожжей, которую готовят заранее, наносят петлей на предметное стекло. Накрывают покровным стеклом и рассматривают под им­мерсионной системой микроскопа. Клетки дрожжей видны и при меньшем увеличении (х400), но для сравнения их величины с дру­гими микроорганизмами препарат лучше рассматривать под им­мерсионной системой.

Микроскопическая картина: округлые и вытянутые клетки, среди которых могут быть и почкующиеся.

Тема 4. МЕТОДЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ

Стерилизация (от лат. sterilis — бесплодие) — обеспложивание, уничтожение патогенных и непатогенных микроорганизмов, их вегетативных и споровых форм в каком-либо объекте. В лаборато­риях стерилизуют питательные среды, стеклянную посуду (про­бирки, пипетки, колбы и др.), инструменты, перевязочный мате­риал, халаты. Для создания специальных условий работы стерили­зуют воздух и все предметы в боксах.

Для стерилизации используют физические, химические или биологические средства в зависимости от стерилизуемого матери­ала. Механизм действия при разных способах стерилизации нео­динаковый, но в основе каждого из них лежит способность нару­шения жизненных процессов микробной клетки: денатурация белков, угнетение функции ферментных систем и др.

В практике применяют полную и неполную стерилизацию. При полной стерилизации уничтожаются вегетативные и споро­вые формы микроорганизмов, при неполной (частичной) —толь­ко вегетативные формы бактерий и вирусы, но с сохранением спо­ровых форм бацилл. При этом обеспечиваются условия, предо­твращающие развитие спор (резкое охлаждение).

Физические методы стерилизации. Прокаливание (фламбирование). На огне пламени горелки (газовой или спирто­вой) стерилизуют бактериологические петли, пастеровские пипет­ки, стекла, инструменты (пипетки, иглы и др.).

Стерилизация сухим жаром. Стерилизация су­хим нагретым воздухом осуществляется в специальном сушиль­ном металлическом шкафу с двойными стенками (печь Пастера). Снаружи шкаф облицован теплонепроницаемым материалом. В верхней части вмонтирован термометр. Между теплонепроницае­мой обшивкой и внутренним металлическим шкафом на дне нахо­дится автоматический электронагревательный элемент. Внутри шкафа на металлических сетчатых полочках размещают стерили­зуемый материал.

В печи Пастера стерилизуют стеклянную чистую, хорошо про­мытую, предварительно высушенную посуду. Колбы закрывают ватными пробками, накрывают бумажными колпачками и завязы­вают. Пробирки, чашки Петри и пипетки завертывают в перга­ментную бумагу.

При включении шкафа в электросеть воздух внутри него на­гревается. По достижении заданной температуры отмечают вре­мя начала стерилизации. Режимы стерилизации: температура 155...ШГС, экспозиция 2 ч; 165...170Х - 1...1,5ч; 180'С—1ч. По истечении времени стерилизации прибор отключают; когда температура'понижается примерно до 45 °С, тогда шкаф откры­вают.

Воспламеняющиеся вещества, жидкости, питательные среды, резиновые предметы сухим жаром стерилизовать нельзя.

Стерилизация влажным жаром. Кипячение — простой, доступный способ стерилизации в специальных метал­лических стерилизаторах (или другой чистой посуде). Кипячени­ем стерилизуют иглы, шприцы, пинцеты, ножницы, скальпели и другие инструменты, резиновые и стеклянные предметы, которые раскладывают в стерилизаторах на металлические решетчатые вставки, покрытые 2...3 слоями марли или тонком слоем гигро­скопической ваты. Шприцы стерилизуют в разборном состоянии,

Рис. 27. Текучепаровой аппарат Коха:

/— паровой котел; 2— крышка; 3 — электронагревательный блок

в иглы вставляют мандрены; режущие инстру­менты—лезвия скальпелей, ножниц следует обертывать марлей или ватой. В стерилизатор наливают воду (желательно дистиллирован­ную), чтобы она полностью покрывала инст­рументы. Для лучшей стерилизации в воду до­бавляют 2 % гидрокарбоната натрия (двуугле­кислой соды). Кипятят в течение 20...25 мин. После стерилизации воду осторожно сливают; инструменты используют только после их охлаждения.

Стерилизацию текучим паром проводят в аппарате Коха (теку­чепаровой аппарат) (рис. 27), который представляет собой сосуд цилиндрической формы, сверху неплотно закрытый крышкой с отверстием посредине для термометра.

На дне аппарата имеется решетчатая подставка на ножках, до уровня которой наливают воду. На подставку помещают специ­альное металлическое ведерко также с дном в виде решетки. В это ведерко ставят стерилизуемые питательные среды в пробирках (или маленьких колбочках). Ведерко закрывают неплотно крыш­кой. При нагревании образующиеся водяные пары, устремляясь вверх, проходят через отверстия в подставке и дне ведерка, обво­лакивают стерилизуемые пробирки со средами и нагревают их. Стерилизуют в течение 30...40 мин.

Учитывая, что однократная стерилизация данным способом уничтожает только вегетативные формы бактерий, а споры сохра­няются, стерилизацию текучим паром осуществляют дробно — три дня подряд. После первой стерилизации материал постепенно ос­тывает при комнатной температуре до следующего дня. Если в культурах имелись споры, они «прорастают» в вегетативную форму. В последующие дни стерилизацию текучим паром повторяют (пол­ная дробная стерилизация). Таким способом часто стерилизуют пи­тательные среды с углеводами, молоко, среды с желатиной, жел­чью, то есть субстраты, которые не выдерживают нагревания выше 100 °С, длительного действия пара или сухого жара.

Тиндализация — дробная стерилизация в водяной бане при 56..,58 "С в течение 5...6 сут: в первый день прогревают в течение 2 ч, в последующие дни — по 1 ч. Метод был предложен Тиндалем для стерилизации материалов, разрушающихся (денатурирующих­ся) при нагревании до температуры выше 58...60 °С (коллоидные растворы, сыворотки крови, асцитная жидкость и другие белоксо-держащие вещества).Тиндализацию можно проводить в водяной бане с регулируемой температурой (рис. 28).

Пастеризация— метод неполной стерилизации, предло­женный Пастером с целью сохранения питательной ценности пи­щевого продукта (молоко, мясные, рыбные и овощные консервы), которая снижается при кипячении (разрушаются витамины и дру­гие нестойкие к действию высокой температуры вещества). Про­дукт нагревают при 80 "С в течение 30 мин, затем резко охлаждают (до4...8°С).

На крупных предприятиях (молокозаводах) применяют специ­альные пастеризаторы с охладительной системой. Пастеризацией достигается частичная стерилизация, так как убиваются вегетатив­ные формы бактерий, а споры сохраняются. Резкое охлаждение препятствует «прорастанию» спор и последующему размножению бактерий.

Стерилизация паром под давлением

(автоклавирование)~ самый эффективный метод стерилизации (тем­пература выше 100 X). Осуществляют его в специальном аппара­те—автоклаве. Принцип стерилизации основан на том, что чис­тый насыщенный водяной пар при высоком давлении, конденси­руясь, повышает температуру внутри котла (автоклава). Уменьшение объема пара после конденсации способствует про­никновению его во внутрь стерилизуемого предмета.'