Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии (стр. 44 )

Для биопробы используют кроликов, которых заражают аппли­кацией патологического материала в подкожный отпрепарирован­ный «кармашек» или инъецируют подкожно сбоку, и белых мы­шей. Кролики гибнут через 1„.2мес, мыши —через 8...14сут.

Обнаружить F. necrophorum можно и методом флуоресцирую­щих антител.

Биопрепараты. Поливалентная концентрированная вакцина против брадзота, инфекционной энтеротоксемии, злока­чественного отека овец и дизентерии ягнят: состоит из смеси на-тивных токсических бульонных культур, обезвреженных прогре­ванием и формалином, сорбированных на геле гидроксида алюми­ния и затем концентрированных. perfringens типов В и D и С. septicum.

Поливалентный анатоксин против клостридиозов овец. Содер­жит анатоксины С. perfringens типов С и В и С. septicum, сорбиро­ванные на геле гидроксида алюминия. К готовым анатоксинам С. perfringens добавляют 25 % вакцины С. septicum.

Антитоксическая сыворотка против анаэробной дизентерии яг­нят и инфекционной энтеротоксемии овец: получают иммунизаци­ей волов-продуцентов анатоксинами С. perfringens типов С и D. Им­мунную сыворотку проверяют на активность в РН: 1 мл препарата должен содержать не менее 10 МЕ антитоксинов каждого типа.

Антитоксические сыворотки С. perfringens типов А, С, D и Е для диагностики болезней животных, вызываемых С. perfringens.

Гидроокисьалюминиевая вакцина против эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота и овец.

Столбнячный анатоксин: представляет собой фильтрат токсин-содержащей бульонной культуры, инактивированной формали­ном при 39...40 "С в течение 25...30 сут.

Вакцину против ботулизма норок готовят из С. botulinum типа С. Бульонную токсинсодержашую культуру инактивируют форма­лином при 37 °С в течение 35 сут. В каждой серии вакцины коли­чество анатоксина варьирует, что не позволяет рекомендовать для вакцинации животных одну постоянную дозу. Поэтому в опыте вакцинации с последующим прямым заражением на мышах рас­считывают ЕД препарата (по методу Кребса) и, исходя из полу­ченных данных, определяют рабочую дозу вакцины.

Ботулинистические диагностические антитоксические сыво­ротки предназначены для идентификации ботулинических токси­нов в реакции нейтрализации.

Тема 22. ПАТОГЕННЫЕ МИКОБАКТЕРИИ

Возбудитель туберкулеза.

Открыт Кохом (1882), принадлежит к порядку Actinomycetales, семейству Mycobacteriaceae, роду Mycobacterium. Микобактерии отличаются ветвистостью, располо­жением в виде буквы V и разнообразием видов, в том числе пато­генных (рис. 66).

Наибольшее значение в патологии сельскохозяйственных жи­вотных и человека имеют следующие виды микобактерии; М. tuberculosis — возбудитель туберкулеза человека, М. bovis — возбу­дитель туберкулеза крупного рогатого скота, М. avium — возбуди­тель туберкулеза птиц.

Туберкулез характеризуется образованием в различных тканях и органах специфических очагов — бугорков (туберкул), по мере

Рис. 66. Формы мхкобактернй

развития процесса подвергающихся творожистому перерождению. При разных формах течения туберкулеза отмечают повышение температуры, увеличение лимфатических узлов, прогрессирующее истощение организма, а при поражении органов дыхания —ка­шель.

Бактериологический диагноз. Основан на мик­роскопии мазков-препаратов из патологического материала, вы­делении чистой культуры возбудителя туберкулеза и заражении лабораторных животных. Исходя из того что туберкулез протекает преимущественно в скрытой форме (латентно), для своевремен­ного выявления больных применяют аллергический метод диагно­стики при помощи аллергена туберкулина.

Для бактериологического анализа направляют при жизни жи­вотного истечения из носа, бронхиальную слизь, молоко (особен­но при увеличении надвыменных лимфоузлов) — не менее 100 мл, фекалий — 30...50, реже мочу — 200 мл. Посмертно или после убоя отправляют кусочки органов с изменениями и бронхиальные, заг­лоточные, средостенные, предлопаточные, надвыменные лимфо­узлы.

При взятии патологического материала необходимо соблюдать правила асептики и профилактические меры, технику безопаснос­ти. Материал в лабораторию лучше доставлять свежим. Если нет такой возможности, то лимфоузлы, кусочки органов консервиру­ют в 30...40 %-м водном растворе глицерина. Обсемененность ис­следуемого материала микобактериями туберкулеза может быть незначительной. Для большей достоверности результатов иссле­дования применяют специальные методы обработки и обогаще­ния, чтобы повысить концентрацию возбудителя в пробах.

Бронхиальную слизь (мокроту) собирают в пробирки с 6%-м раствором серной кислоты, закрывают резиновой пробкой, про­мывают 5...6 мин встряхиванием, центрифугируют, кислоту отса­сывают, к осадку добавляют физраствор, вновь встряхивают и центрифугируют. Так промывают 2...3 раза. Промытый осадок вы­севают на питательные среды и готовят мазки.

Молоко центрифугируют. Осадок обрабатывают также раство­ром серной кислоты, промывают физраствором, центрифугируют. Из осадка готовят препараты-мазки и производят посев на пита­тельные среды.

Масло (2...4 г) вносят в стерильную пробирку, заливают горя­чей водой, закрывают резиновой пробкой, встряхивают 5...10 мин, переворачивают пробирку вверх дном, ставят в штатив и оставля­ют в прохладном месте. Когда масло застынет, осторожно приотк­рывают пробку, жидкость выливают в центрифужные пробирки и далее исследуют как молоко.

Пораженные ткани нарезают мелкими кусочками и растирают в стерильной ступке с 6%-й серной кислотой в соотношении 1: 4, фильтруют через марлю и центрифугируют. Из осадка готовят мазки и производят посевы на питательные среды. Фекалии (50 г) растирают в стерильной ступке с 18 %-м раствором серной кисло­ты, фильтруют через марлю и центрифугируют, исследуют осадок, как в предыдущих случаях.

Содержимое туберкул дополнительно исследуют микроскопи-рованием препаратов, приготовленных из растертых кусочков тво­рожистой массы очажка между двумя предметными стеклами.

Возбудитель туберкулеза относится к группе кислого-, спирто-шелочеустойчивых бактерий, что обусловлено наличием стеари­новых кислот (миколовой, фтионовой) и Других воскоподобных веществ в оболочке микробной клетки. Эти вещества придают микробной клетке гидрофобность, то есть способность отталки­вать воду и водные растворы красителей, кислот и щелочей. В свя­зи с этим бактерии туберкулеза трудно воспринимают краску. Для окрашивания этой группы бактерий применяют специальные ме­тоды, среди которых наиболее распространенным является метод Циля — Нильсена, при котором микобактерии окрашиваются в розово-красный цвет (цв. рис. XII). Грамположительны. Для мик­роскопического исследования патологического материала реко­мендован также люминесцентный метод.

Возбудитель туберкулеза палочковидной формы, длиной 1,5...5мкм и шириной 0,5 мкм. М. tuberculosis — тонкая слегка изогнутая палочка, М. bovis — короткая и толстая, М. avium — мельче остальных видов, обладает полиморфизмом. Микобакте­рии туберкулеза неподвижные, не образуют капсулу и спору. В мазках из исследуемого материала располагаются одиночно и в виде небольших скоплений. В мазках из культур помимо одиноч­ных бактерий встречаются длинные нити с разветвлениями. Часто проявляются неравномерность в окрашивании, наличие в цитоп­лазме зернистости (грамположительные некислотоустойчивые «зерна Муха»), Микобактерии — аэробы. Растут только на специ­альных средах с добавлением глицерина.

Выделение чистой культуры. Для выделения возбудителя из патологического материала используют электив­ные (избирательные) среды — яично-крахмальные, картофельные с глицерином и краской (малахитовая зелень) для задержки роста посторонних микроорганизмов.

Для культивирования используют также синтетические среды, например Финна, Дорсе и Моделя.

Среда Дорсе представляет собой тщательно растертое яйцо с 10 мл раствора Рингера. Затем эту смесь взбалтывают в сосуде с бусами и разливают по пробиркам, стерилизуют дробно: 3 сут при 75 "С по 1 ч.

Среда Моделя: двухосновный фосфат калия — 5 г, цитрат аммо­ния — 10 г, сульфат магния — 0,5 г, сульфат железа — 0,05 г, глице­рин — 50 мл, дистиллированная вода — 1 л, рН среды 7,2. Стери­лизуют 20 мин при 115°С.

Культивировать можно и на обычном картофеле, пропитанном 3...4 %-м глицерином, в глицериновом МПБ и на глицериновом МПА. Срок инкубации при 37 °С от 3...4 нед до 2...3 мес. Рост учи­тывают каждые 5...7сут. Отдельные виды микобактерий могут проявить рост через 2...4 нед.

Культуральные свойства. М. tuberculosis в глице­риновом бульоне на поверхности среды растут в виде толстой складчатой пленки с широким пристеночным кольцом. На плот­ных средах рост обильный, колонии сухие бородавчатые или сморщенные, иногда в виде узелков цвета слоновой кости (цв. рис. XIII). М. bovis в бульоне образует пленку нежную, иногда сетчатую, не покрывающую всей поверхности среды. На плотных средах рост скудный, колонии сухие, мелкие, зернистые, серова­то-белого цвета. М. avium в жидких средах образует сначала сухую, затем ослизняющуюся пленку по всей поверхности среды. На плотных средах влажный и слизистый налет. Колонии серовато-белые или желтоватого цвета с пуговицеобразным круглым возвы­шением, иногда кратерообразным углублением. Растет быстрее, чем остальные виды микобактерий.

При исследовании масла следует учитывать возможность нали­чия кислотоустойчивых сапрофитов (М. phlei и др.), которые рас­тут на питательных средах очень быстро (4 ...7 сут) по сравнению с патогенными микобактериями.

Чистую культуру микобактерий определяют на видовую при­надлежность. Одним из распространенных методов дифференциа­ции является культивирование в глицериновом бульоне с 5 % жел­чи. Каждый вид микобактерий растет в присутствии желчи соот­ветствующего вида животного: М. avium —в присутствии только птичьей желчи, М. bovis — с добавлением желчи крупного рогатого скота. Наличие миколовой кислоты в клетках способствует тому, что патогенные штаммы растут на питательных средах в виде ко­сичек, хорд.