Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии (стр. 40 )

Листерии представлены двумя основными серотипами: «грызу­нов» и «жвачных». Они имеют соматические О - и жгутиковые Н-антигены. О-антиген содержит 4 термолабильных (I, II, IV, V) и вариабельный (III) антигены; Н-антиген содержит антигены А, В, C, D.

Биопроба. К листериозу восприимчивы белые мыши мас­сой не менее 18 г, морские свинки и голуби. Заражают их подкож­но выделенной культурой или взвесью растертой ткани органов, присланных в лабораторию. При заражении у морских свинок используют конъюнктивальную пробу: на конъюнктиву глаза нано­сят две капли испытуемой культуры, затем слегка массируют веки ватным тампоном. Вирулентные штаммы листерий на 2...4 сут вы­зывают гнойный кератоконъюнктивит. При подкожном зараже­нии инъецируют суспензию тканей органов в дозе 0,3...0,5 мл. Обязательно используют суспензию головного мозга. При поло­жительной биопробе животные гибнут через 2...6 сут. Для повы­шения эффективности биопробы белым мышам за 2...3 ч до зара­жения внутрибрюшинно в дозе 5 мг вводят кортизон. При вскры­тии обнаруживают множественные некротические очажки в пече­ни, селезенке, почках. Срок наблюдения за зараженными животными 8 сут.

Паренхиматозные органы павших животных исследуют бакте­риологически. Выделенную чистую культуру идентифицируют. Для идентификации культуры используют также серологический метод — РА на стекле со специфической антилистериозной сы­вороткой в разведении 1 : 50. Антигеном в реакции служит сус­пензия (смыв с агара) суточной культуры на физиологическом растворе (около 10...15 млрд микробных тел в 1 мл). На чистое обезжиренное предметное стекло наносят одну каплю полива­лентной сыворотки и отдельно каплю физиологического раство­ра (контроль). К ней добавляют одну каплю антигена, быстро пе­ремешивают бактериологической петлей или запаянным концом пастеровской пипетки, затем плавно покачивают круговыми движениями. Учет реакции в течение 3 мин: положительный ре­зультат—появление хлопьев в капле с сывороткой, отрицатель­ный — в контроле (в капле с физиологическим раствором без сы­воротки): равномерное помутнение без хлопьевидного агглюти-ната. Запоздалую реакцию не учитывают. Серотип идентифици­руют при использовании типовых сывороток. Видовую принадлежность возбудителя устанавливают также просматрива­нием препаратов-мазков из культуры или непосредственно из патологического материала, обработанных флуоресцирующей специфической сывороткой.

Для серологической диагностики направляе­мые в лабораторию пробы крови (или сыворотки) от животных из хозяйств со специфическим антигеном исследуют методом РСК.

Биопрепараты. Сухая живая вакцина против листериоза сельскохозяйственных животных из штамма АУФ: представляет собой культуру лиофильно высушенного аттенуированного штам­ма листерий первого серотипа. Вакцину контролируют на чистоту роста, безвредность и иммуногенность (на кроликах).

Листериозные диагностические агглютинирующие сыворотки.

Листериозные флуоресцирующие сыворотки.

Вакцина из двух серотипов листерий.

Тема 19. ПСЕВДОМОНАДЫ

Возбудитель сапа (Pseudomonas mallei). Открыт Леффлером и Шютцем (1882). Принадлежит к семейству Brucellaceae. Вызывает заболевание у непарнокопытных животных (лошадь, осел, мул, лошак), а также отмечены случаи у хищных животных — львов, тигров, рысей. К сапу восприимчив и человек.

Сап протекает чаще в хронической форме и характеризуется развитием сапных узелков, склонных к казеозному распаду. Кли­нически может проявляться серозно-гнойным истечением из но­совых отверстий, образованием язв на слизистой оболочке носо­вой перегородки, увеличением подчелюстных лимфоузлов. При кожной форме сапа образуются язвы с ровными краями и сало-видным дном. Заражение происходит контактным путем. При по­дозрении на сап следует строго соблюдать правила личной профи­лактики и техники безопасности, как положено в работе с особо опасными материалами.

Бактериологическое исследование. В лабо­раторию при жизни животного посылают гнойный экссудат из язв, истечения из носа, посмертно — кусочки легких, печени, лимфоузлов, селезенки, пораженные сапными узелками. Гной из язв берут стерильным ватным тампоном и помещают его в про­бирку. Из присланного материала готовят препараты-мазки, окра­шивают их по Граму, а также синью Леффлера или по Романовс­кому — Гимза. Для выделения возбудителя делают посевы на МПА, МПБ с 2,5 % глицерина (рН 7,0...7,2), а также на глицери-низированный картофель. Культивируют при 37 X. Аэроб. Для биологической пробы используют морскую свинку (самца) или кошку.

Микроскопия. В препаратах-отпечатках или мазках об­наруживают одиночно расположенные полиморфные грамотрица-тельные палочки. При окраске синью Леффлера или по Романовс­кому — Гимза в клетках хорошо видна зернистость. Бактерия сапа неподвижна, споры и капсулу не образует.

Рост на питательных средах появляется на 1...2-е сутки, иногда позже.

На МПА с глицерином вырастают слизистые, вязкие колонии серовато-белого цвета с перламутровым оттенком. В глицерино­вом МПБ растет в виде равномерного помутнения, по мере даль­нейшего роста культуры образуется осадок, который при встряхи­вании пробирки поднимается штопорообразно. Встречаются штаммы, растущие в жидкой среде с образованием пленки.

На глицеринизированном картофеле P. mallei растет характер­но: сначала появляются мелкие колонии в виде капелек с желтова­тым оттенком, которые, разрастаясь, сливаются и образуют соч­ный слизистый «медовый» налет. В первые три дня цвет микроб­ной массы янтарно-желтый, затем он становится буро-коричневым. В мазках из культуры часто наблюдают наряду с короткими палочками цепочки, состоящие из 4...8 клеток.

Биопроба. Основана на внутрибрюшинном заражении морской свинки взвесью в физиологическом растворе растертого патологического материала. На 3...4-е сутки после заражения раз­вивается характерный для сапного процесса клинический при­знак — гнойный орхит (и периорхит). На месте инъекции развива­ется и воспалительный процесс с образованием язвы. В случаях возможного загрязнения исследуемого материала посторонней микрофлорой заражение проводят подкожно в дозе 3...5 мл. Ги­бель животных наступает на 8... 15-е сутки.

При развитии орхита, не ожидая гибели, свинку убивают, вскрывают, бактериологически исследуют, выделяют чистую культуру из очагов поражения внутренних органов и семенников.

К сапному микробу чувствительны кошки, но с ними работать опасно, так как при развитии сапного процесса у них поражаются верхние дыхательные пути и при чихании, фырканьи воспали­тельный экссудат распространяется в окружающую среду и пред­ставляет опасность заражения работающего персонала. Поэтому кошек заражают в исключительных случаях, имея на это специ­альное разрешение.

При отсутствии клинических признаков сапа массовое обсле­дование лошадей осуществляют методом РСК, а в условиях хозяй­ства—аллергическим методом. РСК. выявляет активную форму течения сапного процесса. Все формы инфекционного процесса (инкапсуляция, обызвествление очагов) выявляются аллергичес­кой пробой, обычно глазной маллеинизацией.

Биопрепараты. Маллеин — диагностический сапной ал­лерген: культуру возбудителя выращивают в гл и церинизирован­ном бульоне в течение 4мес, стерилизуют автоклавированием, фильтруют через фильтр Зейтца, контролируют на стерильность, безвредность — на белых мышах, специфичность — на здоровых лошадях, стандартизуют по активности в единицах действия на лабораторных животных.

Сапной антиген для РСК: агаровую культуру возбудителя смы­вают фенолизированным физиологическим раствором, стерилизу­ют автоклавированием, отстаивают. В качестве антигена исполь­зуют свободную от клеток культуральную жидкость, проверенную на стерильность, специфичность и активность.

Позитивная сапная сыворотка: предназначена для определения активности антигена (РСК) и в качестве контроля при постановке РСК. Получают гипериммунизацией лошадей.

Возбудитель мелиоидоза (Pseudomonas pseudomallei). Принадле­жит к семейству Pseudomonaceae, роду Actinobacillus. Вызывает са-пополобное заболевание, встречающееся нечасто, но зарегистри­рованное во многих странах различных континентов. К мелиоидо-зу восприимчивы мелкий рогатый скот, свиньи, обезьяны, собаки, кошки, кролики, морские свинки, а также человек. Из организма больного возбудитель выделяется во внешнюю окружающую среду с носовым гнойно-слизистым истечением, с отделениями при кожных поражениях, с мочой и фекалиями. Переносчиками воз­будителя могут быть кровососущие насекомые. Продолжитель­ность болезни составляет 8...30 сут; как правило, летальный исход. Птицы и холоднокровные животные не восприимчивы.

Лабораторная диагностика; патологический ма­териал—трупы мелких животных, экссудаты, кусочки паренхи­матозных органов крупных животных (если нельзя труп послать целиком). Готовят препараты, часть окрашивают по Граму и Ро­мановскому — Гимза, часть используют для люминесцентной микроскопии. Производят посев на МПБ и МПА с глицерином. Эмульсией из патматериала заражают морскую свинку или крысу, кролика.

Морфология. Возбудитель палочковидной формы, раз­мером 2...6мкм, в диаметре 0,5...1 мкм. Имеет сходство с бактери­ей сапа, полиморфный. В молодой культуре встречаются цепочки длиной 15...20 мкм. В мазках из старых культур имеет форму кок-кобактерий. Спору и капсулу не образует. Хорошо окрашивается всеми анилиновыми красками, грамотрицателен. В мазках из па­тологического материала возможна биполярная окраска. Подвиж­ный лофотрих.

Культивирование. Проводят на средах с глицерином (рН 6,8...7,0) при температуре 37 °С в аэробных условиях. Через сутки на МПА с 5 % глицерина появляются R-, S - и М-формы ко­лоний, сочные, слизистые. R-формы складчатые, на поверхности с зубчатыми неровными краями. В МПБ с глицерином рост про­является равномерным помутнением среды с образованием тол­стой морщинистой пленки. При старении культура приобретает коричневую окраску. Хорошо растет на глицеринизированном картофеле и кровяном агаре. Встречаются гемолитические штам­мы.

Возбудитель мелиоидоза расщепляет с образованием кислоты без газа глюкозу, галактозу, лактозу, мальтозу, сахарозу, ксилозу, маннит, дульцит, декстрин. Обладает протеолитическими свой­ствами — ферментирует (разжижает) желатину, яичный белок, пептонизирует молоко.