Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии (стр. 8 )

Метод Михина. Фиксированный мазок из крови или препарат-отпечаток из ткани органа (печени, селезенки, почки) окрашива­ют метиленовой синью с подогреванием до появления паров (5...7 мин). Краску сливают, быстро промывают водой (можно не промывать), просушивают фильтровальной бумагой. Микробная клетка окрашивается в синий цвет, капсула — в светло-розовый.

Метод Романовского—Гимза. Фиксированный препарат окра­шивают, как было указано выше: мазок-препарат помещают в чашку Петри на стеклянные или деревянные палочки отпечатком вниз, под препарат подливают краску, окрашивают 40...50 мин. Результат тот же, что и при окраске по Михину: микробная клетка окрашивается в синий цвет, капсула — в светло-розовый.

Метод Ольта. Свежий водный 2%-й раствор сафранина нали­вают на препарат и выдерживают 5...7 мин. Затем слегка промыва­ют водой и высушивают. Вегетативная клетка — кирпично-крас­ного цвета, капсула — желто-оранжевого.

Приготовление мазков из крови и окраска спирохет. На чистое обезжиренное стекло, ближе к одному из его концов, нанести кап­лю крови. Другое предметное стекло со шлифованным краем прижать под углом 45° к капле крови, а затем скользящим движением передвинуть его к другому концу нижнего стекла. При этом кровь распределится по предметному стеклу тонким слоем. Высушить препарат на воздухе, зафиксировать в жидком фиксаторе (метило­вый спирт или смесь этилового спирта и эфира).

Окрасить препарат по методу Романовского— Гимза (смесь ме-тиленового синего, эозина и азура). На мазок нанести рабочий ра­створ красикапли красителя на 1 мл дистиллированной воды) на 10...20 мин. Затем препарат промыть водой и высушить на воздухе.

Лептоспиры окрашены в розово-сиреневатый, эритроциты крови — в розовый, ядра лейкоцитов — в фиолетовый цвет.

Окраска ршкетсий по методу Здродовского. Окрашивать мазок разведенным фуксином Циля (10...15 капель на 10 мл дистилли­рованной воды) в течение 5 мин, промыть водой. Обработать мазок 0,5%-м раствором лимонной кислоты или 0,01%-м раствором хлоро­водородной кислоты, промыть водой. Окрасить метиленовой си­нью в течение 1 мин, промыть водой и высушить препарат.

Риккетсии, окрашенные по методу Здродовского, — красного цвета, цитоплазма клеток, в которых они паразитируют, — голу­бая, ядра — синие.

Жгутики имеются только у подвижных видов бактерий. Они очень тонкие (менее разрешающей способности микроско­па), окрашиваются плохо, поэтому при световой микроскопии к окраске жгутиков прибегают редко. Чаще бактерий исследуют в живом состоянии (без окраски), определяя их подвижность. У разных видов число и расположение жгутиков неодинаковое (см. рис. 13).

Тема 3. МОРФОЛОГИЯ ГРИБОВ

Плесневые грибы. Грибы — бесхлорофилльные микроорганиз­мы, обитающие на поверхности различных субстратов. Клетки грибов имеют дифференцированное ядро, поэтому их относят к эукариотам. Плесневые грибы не требовательны к питательным средам, но большинство из них нуждаются в кислороде воздуха. Они легко выдерживают низкие температуры, могут жить и раз­множаться в холодильных камерах. Среди грибов встречаются как сапрофиты, так и паразиты.

Все грибы делят на высшие и низшие и относят к четырем классам. Фикомицеты (Phycomycetes) принадлежат к низшим гри­бам, аскомицеты (Ascomycetes), базидиомицеты (Basidiomycetes) и несовершенные (Fungi imperfect^ Deuteromycetes) — к высшим.

Грибы не имеют хлорофилла, поэтому они используют для сво­его питания углерод только из готовых органических соединений, то есть они являются гете

Рис. 20. Вегетативные гифы грибов: 4 — одноклеточные; Б — с перегородками; В--с перетяжками

ротрофами. Все грибы, кроме примитивных низших и некоторых высших (дрожжей), имеют вегетативное тело — мицелий, или грибницу, состоящую из тонких етвящихся гиф. Мицелий может быть погруженный (субстратный), развивающийся внутри среды и поверхностный (воздушный), развивающийся
на поверхности среды. У низ­ших грибов он одноклеточный (рис.20, А), у высших — много­ клеточный септированный, разделенный перегородками или
перетяжками (рис. 20, Б, В).

Гифы размножаются разно­образными способами: споро­образованием (хламидоспоры, артроспоры, бластоспоры, конидиеспоры) (рис.21), половым (рис. 22) и бесполым путем (почкованием, распадом гиф, образо­ванием хламидоспор) (рис. 23).

Рост грибов на сусло-агаре. Мукор — предста­витель класса фикомицетов. Растет в виде пушистого серого нале­та. Рост на средах появляется в течение первых суток.

Аспергилл (леечная плесень) — представитель несовершенных грибов. Растет более медленно. Рост появляется на вторые сутки. Конидии могут быть черного (Aspergillus niger) и зеленовато-желто­го цвета (Aspergillus oryzae).

Пеницилл (кистевик) — представитель несовершенных грибов. Образует на среде нежный налет в виде пушка серо-зеленого цвета или ярко-зеленого с белым ободком до периферии. Хорошо выра­женные кисточки появляются на вторые-третьи сутки.

Приготовление препаратов. Плесневые грибы рассматривают в препарате «раздавленная капля», для чего мате­риал препаровальными иглами распределяют на предметном стек­ле в капле физиологического раствора или стерильной воды.

Препарат мукора готовят из односуточной культуры, аспергил-ла и пеницилла — из двухсуточных. В культурах мукора и аспер-гилла лучше брать серые головки, пеницилла — на границе серого и зеленого по периферии. У аспергилла с серыми, но не черными конидиями хорошо видны стеригмы в виде лепестков подсолнуха. Мукор рассматривают под малым увеличением (объектив х8), ас­пергилл — вначале под малым увеличением (находят расширение конидиеносца), затем под средним. Пеницилл рассматривают под средним увеличением (объектив х40). Необходимо помнить, что плесневые грибы размножаются спорами. Поэтому готовить пре­парат надо вблизи предметного стекла, не допуская рассеивания

Рис. 21. Формы спорообразования у грибов:

I — алейрии; 2 — артроспоры; 3 — яламидоспоры; 4 — бяаетоспоры; 5 —конидии разных ти­пов; 6— спорангиоспоры

Рис. 22. Сиорангни Мисог rasemosus: 1 — мицелий со спорангионос-цами; 2— спорангий; 3— об­разование зигоспоры; ^—зи­госпора; 5—прорастание зи­госпоры

спор. Препаровальные иглы по окончании работы тщательно про­каливают.

Фузариум (несовершенные грибы). Мицелий белый, розовый или желтый. От него отходят короткие ветвящиеся конидиенос-цы, на концах которых располагаются конидии. Они могут быть серповидные с несколькими перегородками (макроконидии) и овальные {микроконидии), чаще без перегородок. Хламидоспоры бывают шаровидными, грушевидными; располагаются в виде скоплений или цепочкой. Об­разуются в старых конидиенос-цах, строме и конидиях. Воз­душный мицелий хорошо раз­вит (рис. 24).

Рис. 23. Бесполое размножение некото­рых видов грибов:

.4 — почкование (дрожжи); Б — распад гиф на отдельные клетки (оидии или артроспоры) и ведущие себя как споры (Cillybia sp.); В — об­разование толстостенных хламидоспор (Fu-sarium)

Иногда мицелий грибов образует ри­зоиды — корешкообразные выросты, при помощи которых крепится к суб­страту и получает питательные веще­ства.

Рис. 24. Конидии рода Fusarium: а- - ко! [иди сносе и; 6 — конидии

Склероции — сплетения гиф округ­лой или продолговатой формы. Они имеют большие размеры, уплотнены, устойчивы к неблагоприятным воздей­ствиям среды, содержат мало воды и много питательных веществ. У некото­рых высших грибов склероции пред­ставляют покоящуюся стадию мицелия. Многие грибы образуют хламидо-споры — разросты мицелия с утолщен­ной оболочкой, внутри которых содер­жатся питательные вещества. Они мо­гут быть одно - и многоклеточными и служат для сохранения вида, так как хорошо переносят неблагоприятные условия среды.

От мицелия отходят плодоносящие тела: спорангиеносцы у му-коровых и конидиеносцы у монилиевых. Спорангиеносцы закан­чиваются расширением — спорангием (см. рис. 21) с эндоспорами. При разрыве спорангия эндоспоры освобождаются и, попадая в благоприятные условия, дают начало новой плесени. На конидие-носцах образуются конидии, или экзоспоры, разной формы: ша­ровидной, булавовидной, продолговатой и др. Конидии могут быть одиночные, когда образуются по одной на каждом ответвле­нии конидиеносца, и множественные, если образуется несколько. Конидиеносцы бывают простые (неразветвленные) и разветвлен­ные. Разветвленные имеют на конце ветвления верхушечные клет­ки шиловидной или веретеновидной формы, называемые стериг-мами. У аспергилла стеригмы располагаются на расширении ко­нидиеносца, они бывают одно - и двухъярусные. Нижняя клетка стеригм несет несколько клеток второго яруса. Возбудитель эрго­тизма (С. ригригеа) проходит сложный цикл развития и в конечном итоге, попадая на зерновку злаков, формирует токсичные для жи­вотных и человека рожки (рис. 25).

Фузариумы широко распространены в природе. Многие из них вызывают порчу плодов, овощей. Фузариумы, особенно при низ­ких температурах, образуют токсины. При поедании животными и птицей пораженных растений и зерна наступает отравление. Кли­нически это проявляется нарушением координации движений, поражением слизистой ротовой полости, расстройством пищева­рения.