Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии (стр. 1 )

УЧЕБНИКИ И УЧЕБНЫЕ ПОСОБИЯ ДЛЯ СТУДЕНТОВ

ВЫСШИХ УЧЕБНЫХ ЗАВЕДЕНИЙ

В. Н. КИСЛЕНКО

ПРАКТИКУМ

ПО ВЕТЕРИНАРНОЙ

МИКРОБИОЛОГИИ

И ИММУНОЛОГИИ

Допущено Министерством сельского хозяйства РФ в

качестве учебного пособия для студентов высших

учебных заведений, обучающихся по специальности

«Ветеринария»

МОСКВА «КолосС» 2005

УДК 619: 579(075.8) ББК 48я73 К44

Редактор

Рецензенты: доктор ветеринарных наук, профессор (Ин­ститут веете

ринарной медицины Омского ГАУ); доктор ветеринарных наук, про­фессор IT. И. Ба

рышников (Институт ветеринарной медицины Алтайского ГАУ)

К44 Практикум по ветеринарной микробиологии и иммуно­логии. — М.: КолосС, 2005.— 232 с. [2] л.: ил. — (Учебники и учеб. пособия для студентов высш. учеб. заведений). ISBN 5-9532-0332-2

Практикум состоит из двух разделов. Раздел «Общая микробиология» содержит сведения о правилах работы в бактериологической лаборатории, описание основных микробиологических, генетических и иммунологичес­ких методов изучения микроорганизмов. В разделе «Возбудители инфек­ционных болезней» перечислены методы лабораторной диагностики, диф­ференциации возбудителей и дан перечень применяемых биопрепаратов.

Приведены методические указания к проведению практических заня­тий для преподавателей.

Прилагаются комплекты тестов на электронном носителе (CD-диске) по общей и частной микробиологии, иммунологии, а также по теоритичес­кому курсу.

Для студентов высших учебных заведений по специальности «Ветери­нария».

ВВЕДЕНИЕ

Ветеринарные лаборатории — это учреждения государственной ветеринарной службы, деятельность которых направлена на обес­печение благополучия в животноводстве, предупреждение и лик­видацию болезней и гибели животных, а также на охрану населе­ния от болезней, общих для животных и человека. По назначению ветеринарные лаборатории бывают районные, межрайонные (зо­нальные), областные (краевые) и республиканские.

Основная задача ветеринарных лабораторий — установление точного диагноза болезней сельскохозяйственных животных, включая птиц, пушных зверей, рыб и пчел, а также проведение экспертизы мяса, молока и других пищевых продуктов животного и растительного происхождения. В лабораториях также выполня­ют научные работы, осуществляют производство некоторых био­стимуляторов, антибиотиков и др.

Материалом для лабораторных исследований служат кровь, моча, мокрота, молоко, фекалии, содержимое абсцессов (гной), полученные при жизни животного; кусочки паренхиматозных ор­ганов или других тканей после их гибели, пробы объектов окружа­ющей среды (вода, воздух, почва, корма, растения, смывы с пред­метов ухода). Материал в лаборатории исследуют бактериологи­ческими, серологическими, гистологическими, биохимическими, микологическими и токсикологическими методами, для чего дол­жны быть созданы необходимые условия (специально отведенные помещения, оборудование, микроклимат и др.).

Лаборатория занимает отдельное здание, расположение вдали от проезжих дорог. В ней должны быть приемное отделение, пато-логоанатомический, бактериологический, серологический, биохи­мический и вирусологический отделы, а также специальные по­мещения для термостатов, мытья посуды, автоклавная. В комнате для мытья посуды находятся столы, раковины, горячее и холодное водоснабжение, газовая или электрическая плита, стеллажи для вымытой посуды, вытяжной шкаф, эмалированные ванны, тазы и другие емкости, раствор кислоты в стеклянных сосудах для обезза­раживания пипеток, предметных стекол и другой посуды. Отдель­ное помещение отводят под бактериологическую кухню (средова-рочная), где готовят питательные среды для культивирования микроорганизмов, подготавливают посуду для стерилизации. Здесь же в шкафах хранят стерильную посуду и хорошо упакован­ные химические вещества, компоненты питательных сред.

Для выполнения работы в асептических условиях оборудуют специальные изолированные помещения — боксы (англ. box — ко­робка), состоящие из собственно бокса и предбоксника. Исполь­зуют также настольные боксы, предметы и воздух в которых обез­зараживают лампами УФИ, и ламинарные шкафы, где кроме это­го применяют активное удаление воздуха.

Лабораторных животных (белых мышей, морских свинок, бе­лых крыс, кроликов и др.) размещают в виварии. Как правило, в виварии содержат также здоровых баранов-доноров, кровь кото­рых используют для реакции связывания комплемента (РСК) и приготовления питательных сред. Зараженных лабораторных жи­вотных содержат в изолированном помещении.

Кроме того, в здании есть комнаты для специалистов, обслужи­вающего персонала, кабинет заведующего, библиотека, весовая, раздевалка, склад и др.

Чтобы поддерживать надлежащую чистоту, пол в комнатах по­крывают линолеумом или кафельной плиткой. Стены и потолки, как правило, гладкие (без карнизов и лепных украшений), с зак­ругленными углами, окрашенные в светлые тона масляной крас­кой. Потолки можно белить известью. Желательно стены облице­вать пластиком или плиткой от пола до потолка.

В лаборатории должны быть горячая и холодная вода, канализация, педальные ведра для мусора, которые ежедневно освобождают, моют и дезинфицируют, полотенца, мыло и дезинфицирующий раствор. В комнатах находится только самое необходимое оборудование: столы, шкаф для хранения мелкой аппаратуры, красок, реактивов, посуды, инструментов и т. п. Столы обычно устанавливают перед окнами. Они должны быть устойчивыми, удобными, высотой 80 см, с закраинкой. Поверхность столов покрывают пластиком или линолеумом, стеклом или белой специальной краской. На столе размещают микроскоп, а также необходимые предметы для бактериологической работы.

Бактериологический метод исследования, как правило, вклю­чает микроскопию, выделение и изучение свойств чистой культу­ры возбудителя болезни и заражение лабораторных животных (биологическую пробу). Результаты бактериологического анализа за подписью заведующего отделением или директора лаборатории сообщают только официальным лицам: ветеринарному врачу, зоо-инженеру, руководителю предприятия.

Оборудование микробиологической лаборатории.

Для работы в лаборатории необходимы следующие приборы и аппараты: биоло­гические иммерсионные микроскопы с дополнительными при­способлениями (осветитель, фазово-контрастное устройство, тем-нопольный конденсор и др.), люминесцентные микроскопы, тер­мостаты, аппаратура для стерилизации, рН-метры, аппараты для

получения дистиллированной воды (дистиллятор), центрифуги, технические и аналитические весы, аппаратура для фильтрования (фильтр Зейтца и др.), водяные бани, холодильники, аппарат для изготовления ватно-марлевых пробок, набор инструментов (бак­териологические петли, шпатели, иглы, пинцеты и др.), лабора­торная посуда (пробирки, колбы, чашки Петри, матрацы, флако­ны, ампулы, пастеровские и градуированные пипетки) и др.

В лаборатории выделено специальное место для окраски мик­роскопических препаратов, где находятся растворы специальных красителей, спирт, кислоты, фильтровальная бумага и др. Каждое рабочее место снабжено газовой горелкой или спиртовкой, бан­кой с дезинфицирующим раствором. Для повседневной работы лаборатория должна располагать необходимыми питательными средами, химическими реактивами, диагностическими препарата­ми и другими лабораторными материалами. В крупных лаборато­риях имеются термостатные комнаты для массового выращивания микроорганизмов, постановки серологических реакций.

Для выращивания, хранения культур, стерилизации лаборатор­ной посуды и других целей предназначена следующая аппаратура:

1. Термостат. Аппарат, в котором поддерживается постоянная температура. Оптимальная температура для размножения многих микроорганизмов составляет 37 "С. Термостаты бывают воздушшными и водяными.

2.  Микроанаэростат. Аппарат для выращивания микроорганизмов в анаэробных условиях.

3.  Холодильники. Используют в микробиологических лабора­ториях для хранения культур микроорганизмов, питательных сред, крови, сывороток, вакцин и прочих биологических препара­тов при температуре около 4 °С. Для хранения препаратов ниже 0°С предназначены низкотемпературные холодильники, в которых поддерживается температура —20 "С и ниже.

4.  Центрифуги. Применяют для осаждения микроорганизмов, эритроцитов и других клеток, разделения неоднородных жидкостей (эмульсии, суспензии). В лабораториях используют центрифуги с различными режимами работы.

5.  Сушильно-стерилизационный шкаф (печь Пастера). Пред­назначен для воздушной стерилизации лабораторной посуды и других материалов.

6.  Стерилизатор паровой (автоклав). Предназначен для стери­лизации паром под давлением. В микробиологических лаборато­риях используются автоклавы разных моделей (вертикальные, го­ризонтальные, стационарные, переносные).

Правила работы в микробиологической лаборатории.

Микробио­лог имеет дело преимущественно с чистыми культурами микроор­ганизмов, которые являются потомством одной клетки. Посколь­ку в воздухе и на поверхности предметов в лаборатории (на столах, приборах, инструментах, а также на одежде, руках и др.) всегда присутствует множество разнообразных микроорганизмов, следу­ет постоянно заботиться о сохранении чистоты изучаемых куль­тур. Поэтому при работе в микробиологической лаборатории не­обходимо строго соблюдать определенные правила, одно из кото­рых — поддержание чистоты, включая ежедневную гигиеническую уборку всех помещений.

Для уничтожения микроорганизмов в воздухе и на поверхнос­тях существуют различные способы дезинфекции.

Воздух в лаборатории частично очищают проветриванием. Вентиляция резко снижает численность микроорганизмов в воз­духе, особенно при значительной разнице температур снаружи и внутри помещения. Продолжительность проветривания не менее 30...60 мин.

Более эффективный и наиболее часто применяемый способ обеззараживания воздуха — воздействие ультрафиолетовым излу­чением (УФИ), обладающим высоким антимикробным действием и вызывающим гибель не только вегетативных клеток, но и спор микроорганизмов. Из-за слабой проникающей способности ульт­рафиолетовое излучение не проходит через обычное стекло и лег­ко поглощается частицами пыли. Поэтому для стерилизации вре­мя облучения составляет от 30 мин до нескольких часов в зависи­мости от степени загрязненности воздуха.