Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии (стр. 41 )

Антигенная структура возбудителя мелиоидоза ха­рактеризуется наличием соматического О - и жгутикового Н-анти-генов. О-антиген имеет родство с антигенами бактерии сапа и сальмонелл, то есть не обладает специфичностью. У P. pseudomallei обнаружены К - и М-антигены, обладающие типоспецифичнос-тью, что используют в серологической идентификации методом РА с соответствующими типоспецифическими анти сывороткам и.

Морских свинок, крыс и кроликов заражают суспензией при­сланного материала или выделенной из него бактериальной культурой. После гибели животных трупы их вскрывают и исследуют бактериологически. Выделенную чистую культуру идентифициру­ют по культурально-морфологическим, тинкториальным и биохи­мическим свойствам.

Серологическую диагностику осуществляют методом РА с сыворотками больных хроническим мелиоидозом, но антигенное родство возбудителя с бактерией сапа снижает практическую значимость РА.

Возбудитель псевдомоноза норок {Pseudomonas aeruginosa). При­надлежит к семейству Pseudomonadaceae, роду Pseudomonas.

Псевдомоноз — остропротекающее инфекционное заболева­ние. Характеризуется геморрагической пневмонией, признаками сепсиса. Кроме норок восприимчивы лисицы, песцы; у животных других видов возбудитель может служить причиной пневмоний, послеродовых, постхирургических осложнений.

Бактериологическое исследование. Включа­ет в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, выделение чистой культуры посевом на пи­тательные среды и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным и серологическим свойствам.

В лабораторию направляют пораженные участки легких, регио­нарные лимфатические узлы, селезенку, печень, почки.

Микроскопия. P. aeruginosa в мазках, окрашенных по Граму, обнаруживают в форме прямых или изогнутых грамотрица-тельных палочек длиной 0,5...1,4мкм, шириной 0,2...0,4мкм, без капсул и спор. Образует жгутики. Располагается в виде одиночных клеток, коротких цепочек.

Культурально-биохимические свойства. Возбудитель—аэроб, температурный оптимум 35...37°С, к пита­тельным средам нетребователен. Исследуемый материал высевают на МПА и в МПБ. Рост через 24 ч. В МПБ проявляется помутне­нием среды, образованием поверхностной пленки и серовато-бе­лого осадка. За счет пигмента среда окрашена в сине-зеленый цвет; по мере старения культуры цвет колоний становится бурым. На МПА возбудитель формирует в основном два типа колоний: крупные (диаметр'2...5мм), полупрозрачные, сероватые, гладкие, с плоскими краями и приподнятым центром, а также мелкие ше­роховатые. Штаммы, выделенные из респираторного и мочеполо­вого трактов, могут образовывать слизистые колонии. Среда вок­руг колоний окрашена за счет пигмента в сине-зеленый цвет. Воз­будитель синтезирует четыре типа пигмента: пиоцианин (сине-зе­леный или желто-зеленый), флуоресцеин, пиорубин и черно-бурый пигмент. Для культивирования P. aeruginosa при пер­вичной изоляции из исследуемого материала используют специ­альные селективные среды с антибиотиками.

У выделенных культур изучают ферментативные свойства. Для P. aeruginosa характерны следующие признаки: образование аргининдигидролазы, оксидазы, гидролиз желатины, расщепление глюкозы, бета-аланина, D-, L-аспарагина, денитрификация и способность к росту при 41 "С.

Вид гетерогенен по соматическим О-антигенам. Для иденти­фикации на уровне О-серогруппы используют РА на стекле, при­чем исследуют только культуры, у которых отмечены минимум два из трех физиологических признаков, характерных для вида: обра­зование пигмента пиоцианина, расщепление глюкозы, рост при 41...42 °С. Используют набор из 3 поливалентных и 11 моновален­тных сывороток. Антигеном служит 18...20-часовая агаровая куль­тура P. aeruginosa, инактивированная кипячением в водяной бане в течение 1,5ч [концентрация (3...5)109/мл]. Антиген первоначаль­но исследуют с поливалентными сыворотками, при получении по­ложительного результата — с моновалентными, входящими в со­став той или иной поливалентной сыворотки. Результат учитыва­ют через 3...6 мин.

Биопрепараты. Моновалентная формолквасцовая вак­цина против псевдомоноза норок.

Диагностические О-агглютинируюшие сыворотки для серо-групповой идентификации P. aeruginosa включают в себя три по­ливалентные сыворотки - № 1 (03, 04, 05, 06, 07), № 2 (02, 08, 09), №3 (010, 011, 012) и одиннадцать соответствующих моновалент - • ных сывороток, которые предназначены для идентификации Р. aeruginosa на уровне О-серогруппы.

Тема 20. ВОЗБУДИТЕЛЬ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ

Возбудитель сибирской язвы {Bacillus anthracis) выделен и изу­чен отечественным ученым Брауэлем (1857). Сибирская язва —- за­разная остропротекающая болезнь многих видов животных и че­ловека. Возбудитель сибирской язвы принадлежит к порядку Eubacteriales, семейству Bacillaceae.

Лабораторное исследование. У павших живот­ных отрезают ухо с той стороны, на которой лежал труп. Прежде чем ухо отрезать, на него накладывают две лигатуры: одну ближе к голове, у основания уха, другую — отступя на 1 см от первой, за­тем между ними делают разрез. Поверхность разреза на трупе при­жигают раскаленным металлическим предметом (шпателем) или химическими средствами — кристаллическим пермарганатом ка­лия, фенолом, формалином. Отрезанное ухо завертывают в перга­ментную бумагу или целлофан, упаковывают в непротекающий деревянный или железный ящик (пенал, коробку).

Помимо уха патматериалом может служить кровянисто-пенис­тое истечение из естественных отверстий трупа (носовое истече­ние, из глаз, рта, анального отверстия). Истечения наносят на чи­стое стекло в виде толстого мазка, сверху накрывают другим стек-

лом, завертывают в пергаментную бумагу или целлофан, упаковы­вают в коробку. Кровянистые истечения можно взять путем про­питывания кусочка мела.

В случаях, когда труп вскрыт или подозрение на сибирскую язву появилось при разделке туши после убоя животного, для бак­териологического исследования направляют кровь из сердца, ку­сочки паренхиматозных органов, лимфоузлы. Патологический ма­териал помещают в банки с притертой пробкой или целлофано­вые мешки, обертывают тканью, смоченной дезинфицирующим раствором, упаковывают и срочно с нарочным и сопроводитель­ным письмом отсылают в лабораторию.

Бактериологическое исследование. Соблю­дая правила личной профилактики, в лаборатории ухо животного фиксируют в кюветке, подрезают и отпрепаровывают в виде треу­гольника кожу снаружи уха, где она более подвижна. Лоскут кожи откидывают и к подкожной клетчатке прикладывают предметные стекла— готовят препараты-отпечатки. Кляч-препараты фиксиру­ют и окрашивают по Граму и специально по Михину (или по Ро­мановскому — Гимза азур-эозином или по Ольту сафранином). Подкожную клетчатку мелко нарезают маленькими стерильными ножницами и растирают в стерильной ступке с песком и физиоло­гическим раствором. Данную тканевую взвесь используют для по­сева на питательные среды и заражения лабораторных животных. В пастеровскую пипетку капли межтканевой жидкости подкож­ной клетчатки, кровь и приготовленную взвесь набирают с помо­щью резиновой груши. Аналогично исследуют и другой материал.

Микроскопия. В. anthracis — неподвижный, грамполо-жительный, палочковидной формы; в препаратах из патологичес­кого материала располагается короткими цепочками по нескольку клеток или одиночно. Длина 4...8 мкм, ширина 0,5... 1 мкм. Приле­гающие друг к другу концы бацилл кажутся обрубленными, на­ружные — закругленные. В организме формирует капсулу (цв. рис. X). В препаратах-мазках из культуры характерно расположе­ние длинными нитевидными цепочками (стрептобациллы). В культурах, почве, воде, кормах формирует стойкую форму — спо­ру. Для спорообразования необходим доступ кислорода, темпера­тура в пределах 12...42 "С.

Культуральные свойства. К питательным средам неприхотлив. Аэроб. Оптимальная температура роста 35.„37 °С. Из приготовленной тканевой взвеси пипеткой делают посев в МПБ, МПА. В МПЖ засевают в столбик среды уколом. В жидкой среде рост возбудителя характеризуется образованием на дне про­бирки рыхлого ватообразного осадка при сохранении прозрачнос­ти бульона. На МПА через 24...48 ч В. anthracis образует шерохова­тые колонии R-формы с краями волнистыми, локоноподобными. В МПЖ возбудитель ближе к поверхности (больше доступ кислорода) растет обильнее в виде ответвлений от места укола. По мере углубления рост ослабляется, ответвления становятся короче. Рост возбудителя в МПЖ напоминает перевернутую вершиной вниз елочку: через 2...3 сут желатина медленно разжижается в виде во­ронки (пептонизируется). На кровяном агаре гемолиз не вызыва­ет. Молоко свертывает через 2...4 сут; сгусток казеина пептонизи­руется.

Патогенность. Ставят биопробу на белых мышах, морс­ких свинках или кроликах. Животных заражают подкожно непос­редственно тканевой взвесью или выросшей культурой: дозой 0,1мл —мышей, 0,2 мл — морских свинок и 6,3 мл—кроликов. Гибель наступает через 1 ...Зсут. Павших животных вскрывают и исследуют бактериологически.

Для того чтобы обнаружить В, anthracis в исследуемом материа­ле и идентифицировать выделенную культуру, используют также сибиреязвенные фаги (гамма-фаг, фаг ВИЭВ). На засеянную по­верхность исследуемой культуры (на поверхность агара) наносят каплю сибиреязвенного фага и инкубируют при 37 °С. В случае гомологичное™ культуры и фага по следу капли уже через 6...8 ч образуется прозрачная дорожка лизиса; по краям дорожки отмеча­ется рост засеянной культуры.

Для идентификации В. anthracis прибегают к феномену «оже­релья»: под действием малых концентраций пенициллина в ага­ровой среде (0,01...0,5 ЕД/мл) бациллы сибирской язвы приоб­ретают форму сферопластов в виде шаров, напоминающих оже­релье.

Для дифференцирования В. anthracis от спорообразующих сап­рофитных бацилл применяют МФА.

Серологическая диагностика. В несвежем, раз­ложившемся патологическом материале бактериологическая диаг­ностика неосуществима. В таких случаях применяют реакцию преципитации. Антигеном (преципитиногеном) для реакции слу­жит вытяжка из тканей органов павшего животного (в том числе ухо). Экстрагируемый растворимый антиген разрушенных, лизи-рованных при гниении (или кипячении) бактерий термоустойчив. Поэтому преципитиноген готовят кипячением кусочков ткани в физиологическом растворе. Реакцию преципитации ставят в ма­леньких пробирках Уленгута или методом диффузии в агаровом геле.