Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии (стр. 49 )

Тема 26. РИККЕТСИИ

Риккетсии относят к порядку Rickettsiales семейству Rickettsiaceae. Впервые описаны Риккетсом (1909—1910), в честь которого эти микроорганизмы получили свое название. Данная группа включает несколько видов, вызывающих различные болез­ни животных и человека. При многих риккетсиозах возбудители переносятся членистоногими кровососущими — клещами, вшами, блохами.

Риккетсии — полиморфные микроорганизмы, сходные морфо­логически с бактериями (овальные, кокковидные, палочковидные формы). Палочковидные формы длиной 0,3...1,2 мкм, диаметром ' 0,2...0,3 мкм. Риккетсии трудно поддаются окраске, биполярны, грамотрицательные. По методу Романовского — Гимза в отличие от других микроорганизмов окрашиваются в розовый цвет (мета-хроматически).

Возбудитель Ку-лихорадки (Coxiella burneti). Заболевание было описано в Австралии Дерриком (1937). Возбудитель получил на­звание по первоначальной букве провинции Квисленд. Вызывает зоонозный риккетсиоз (болеют крупный рогатый скот, овцы и. человек). Переносчики — клещи. Человек инфицируется, глав­ным образом, употребляя некипяченое молоко. Возбудитель чаще в виде кокковидной формы, реже встречаются палочковидные и нитевидные формы.

Культивирование возможно в желточном мешке куриных эмб­рионов. Культивированными риккетсиями возможно осуществить биопробу — любым способом заражая морских свинок, сусликов или хомяков. Заболевание проявляется лихорадкой. Белые мыши, белые крысы, кролики устойчивы к данному возбудителю; при за­ражении их внутривенно или в переднюю камеру глаза (после предварительной анестезии) риккетсиоз протекает бессимптомно. При убое зараженных животных возбудителя обнаруживают в почках, селезенке.

Диагностика. Основывается на биопробе: кровью боль­ного животного, взятой в период лихорадки, заражают морскую свинку внутрибрюшинно или интратестикулярно. В момент наи­высшего подъема температуры свинок убивают; в мазках из пече­ночной ткани или селезенки обнаруживают риккетсии.

При риккетсиозах применяют также серологические (РА, РП, РГА, РСК) и аллергические методы диагностики. Антиген для РА — консервированная взвесь риккетсии, для РСК и РП— вы­тяжка из желточного мешка инфицированных эмбрионов. Ис­пользуют также метод флуоресцирующих антител.

Возбудитель гидроперикардита (Cowdria ruminantium). Открыт Ковдри (1925). Кокковидной формы, развивается в эндотелии стенки сосудов. Болеют гидроперикардитом крупный рогатый скот, овцы, козы. Переносчик — клеши. Заболевание характеризуется высокой температурой (41...42 °С), общей слабостью, судоро­гами. Возможны аборты. Течение острое.

Материал для исследования. Кровь больного животного, клетки РЭС (костный мозг, селезенка). В мазках кро­ви в период лихорадки (при жизни) и в мазках из соскобов ярем­ной или полой вены (посмертно) обнаруживают возбудителя.

Биопроба. Ставят на овцах или кроликах, морских свинках и белых крысах. Заражают интрацеребрально или внутрибрюшин-но. При гистологическом исследовании патологического материала риккетсии обнаруживают в эндотелии сосудов мозга и почек.

Тема 27. ХЛАМИДИИ

Возбудителей хламидиозов относят к порядку Chlamydiales, се­мейству Chlamydiaceae, включающему в себя один род Chlamydia с двумя видами С. trachomatis и С. psittaci. Это грамотрицательные не­подвижные облигатные паразиты с выраженным полиморфизмом, чаще кокковидной формы. С. trachomatis патогенен для человека и мышей. C.psittaci вызывает ряд инфекционных заболеваний у жи­вотных и птиц. Развитие патологического процесса зависит от мес­та локализации возбудителя. Хламидии чаще поражают респира­торные органы и кишечный тракт у птиц, ягнят, телят, поросят; ге­ниталии у крупного и мелкого рогатого скота; синовиальные ткани телят, поросят, ягнят, жеребят; слизистые оболочки глаз крупного рогатого скота, свиней, овец, кошек и др. Клинические проявления хламидиоза разнообразны: диарея, пневмонии, конъюнктивиты, полиартриты, перикардиты, энцефалиты, аборты, мертворождение, бесплодие, вагиниты, эндометриты и др. К С. psittaci восприимчивы дикие и домашние птицы (свыше 130 видов). Из домашних птиц чаще болеют утки, индейки, гуси, реже — куры, голуби (орнитоз).

Бактериологическое исследование. Включа­ет в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой и люминесцентной микроскопии, выделение чистой культуры методом биопробы и идентификацию возбудителя по морфологическим свойствам.

От павших или вынужденно убитых животных в лабораторию направляют кусочки паренхиматозных органов; при аборте — плод целиком или паренхиматозные органы и сычуг; для прижиз­ненной диагностики — пробы эякулята или замороженной спер­мы, кровь для серологических исследований. Материал берут в те­чение 2 ч после гибели, убоя или аборта, помещают в термос со льдом.

Микроскопия. Для световой микроскопии мазки из па­тологического материала окрашивают по Романовскому— Гимза (хламидии в зависимости от стадии развития окрашены в красно-или сине-фиолетовый цвет), Стемпу. При окраске по Стемпу препараты фиксируют нагреванием, окрашивают 15 мин фуксином Циля (рН 7,4), разведенным дистиллированной водой в соотно­шении 1 : 5, промывают дистиллированной водой. Затем обраба­тывают 1 мин 0,05 %-м раствором серной кислоты, вновь промы­вают дистиллированной водой, докрашивают 30 с 1 %-м водным раствором малахитовой зелени, после чего промывают водой и микроскопируют: хламидии ярко-красные на зеленоватом фоне клеток. При иммунофлуоресцентном выявлении хламидии в мате­риале используют прямой и непрямой варианты; в зависимости от этапа морфогенеза размеры хламидии варьируют от 0,2...0,4 до 0,6...1,5мкм.

Культурально-биохимические свойства. Для выделения хламидии используют 6...7-суточные куриные эмб­рионы или лабораторных животных. Из материала готовят суспен­зию на физиологическом растворе (1:10), центрифугируют, надо-садочную жидкость обрабатывают антибиотиками (100 ЕД/мл пе­нициллина, 500ЕД/мл стрептомицина) при 4°С в течение 24 ч, одновременно контролируя на стерильность. Затем исследуемый материал в объеме 0,2 мл вводят в желточный мешок. Эмбрионы инкубируют в термостате при 37 °С и относительной влажности 75 %. Эмбрионы, погибшие на 4...12-е сутки, вскрывают, аллантоисную жидкость контролируют на бактериальную контаминацию. Из желточных мешков готовят мазки-отпечатки и исследуют на нали­чие хламидии методом микроскопии. При отсутствии специфи­ческой гибели эмбрионы на 12-е сутки вскрывают и проводят вто­рой пассаж, при необходимости — и третий.

Биопроба. Для выделения хламидии заражают пять белых мышей или двух-трех морских свинок. Материал, подготовлен­ный ранее описанным способом, вводят внутрибрюшинио или интраторакально мышам в дозе 0,3 мл, морским свинкам — 0,5 мл. Наблюдение ведут в течение 3 сут. В положительных случаях жи­вотные погибают на 7...10-е сутки. При вскрытии обнаруживают большое количество серозно-фибринозного экссудата в грудной и брюшной полостях, очаговую пневмонию, кровоизлияния под ле­гочной плеврой. При отсутствии гибели животных проводят сле­пые пассажи. Обнаружение и идентификацию хламидии прово­дят, как описано ранее.

Серологическая диагностика. Основана на по­становке РСК или РДСК. Сыворотки исследуют в разведении 1: 5 и 1 : 10; положительным результатом считают задержку гемолиза на два—четыре креста в разведении 1:10, сомнительным — на один крест в разведении 1: 10 и на один—четыре креста — в разве­дении 1:5.

Биопрепараты. Инактивированная эмульгированная вакцина против хламидиозного аборта овец.

Набор антигенов и сывороток для серологической диагностики хламидиозов сельскохозяйственных животных.

Тема 28. ПАТОГЕННЫЕ ГРИБЫ

Возбудители дерматомикозов (стригущего лишая и парши). Отно­сят к несовершенным грибам к порядку Hyphomycetales, родам Trichophyton, Microsporum и Achorioti.

Возбудитель трихофитии рода Trichophyton (tricho — волос, phytum — растение). Основные виды трихофитона Т. faviforme, Г. verrucosum вызывают заболевание преимущественно у молодня­ка крупного рогатого скота и овец, реже у лошадей, собак, верб­людов; Т. equinum — возбудитель лишая лошадей (1...2 % случаев); Т. gypseum, T. mentagrophytes — основные возбудители трихофитии у мышей, крыс, собак, кроликов, кошек, морских свинок, пушных зверей, редко лошадей, крупного рогатого скота.

Трихофития характеризуется появлением облысевших участ­ков кожи, в первую очередь в области головы, затем поражение может распространиться дальше по поверхности тела животного. В зоне пораженных участков волос хрупкий, ломкий, отторгаю­щиеся чешуйки эпидермиса иногда слипаются в виде корочек. На концах оставшихся волос заметны серовато-белые «чехлы» (споры гриба).

Для лабораторного исследования делают соскоб пораженного эпидермиса с захватом волос на границе со здоровой тканью. Го­товые препараты из патологического материала микроскопируют. При сомнительном результате делают посев на плотную среду Со-буро. Предварительно соскобы обрабатывают 10 %-м раствором щелочи (КОН или NaOH) в течение 15...30 мин. Препаровальной иглой (или бактериологической петлей) несколько волосков пере­носят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом. Иглу (или петлю) следует сразу хорошо прокалить на пламени горелки. Приготовленный препарат («раздавленная капля») микроскопиру­ют под объективом сухой системы средней степени увеличения. На пораженном волосе внутри и снаружи его отчетливо видны расположенные рядами круглые, хорошо преломляющие свет ко­роткие гифы мицелия гриба (споры).

Для выделения чистых культур материал после десятиминут­ной обработки 5...10%-м раствором шелочи промывают стериль­ным физиологическим раствором при центрифугировании. Об­ломки волосков длиной 1...2см переносят на агар Сабуро в 8...10 пробирок и располагают их на расстоянии 1 см друг от друга. Культивируют при 26...28 °С в аэробных условиях. Из-за сильной загрязненности патологического материала в питательную среду добавляют пенициллин и стрептомицин по 100...200 ЕД/мл.