Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии (стр. 46 )

Возбудитель актиномикоза — Actinomyces bovis. Актиномикоз характеризуется образованием в различных тканях медленнорас­тущей плотной ограниченной припухлости — актиномикомы. В образовании актиномикомы могут участвовать и другие актино-мицеты. A. israeli — грамположительный микроорганизм. В есте­ственных условиях в основном восприимчив крупный рогатый скот, но отмечены случаи заболевания актиномикозом свиней. Болеет актиномикозом и человек.

Лабораторная диагностика. На исследование на­правляют воспалительный экссудат и кусочки пораженной ткани из актиномикомы (при наружных поражениях), а при убое — ку­сочки пораженных органов. Исследование заключается главным образом в микроскопии препаратов-мазков и в случае необходи­мости в посеве на питательные среды. Установлено, что при внут­римышечном заражении 5...7-суточных крольчат у них появляют­ся актиномикозные поражения спустя 2О...25сут, в пораженной ткани и экссудате которых обнаруживают возбудителя.

Возбудитель актиномикоза морфологически неоднороден в культуре и в пораженной ткани. В патологическом материале нахо­дят «зернышки» серо-грязного цвета — «друзы». Препаровальными иглами берут несколько зерен и раздавливают их между двумя пред­метными стеклами. Один препарат накрывают покровным стеклом и рассматривают в неокрашенном виде при среднем увеличении под сухим объективом, другой мазок красят по Граму. В «друзе» центральная часть гриба представляет собой густое переплетение нитей мицелия в виде клубка, а вокруг центральной части — була­вовидные радиальные разрастания. Центральная часть — жизнеспособная, при пересевах дает рост гриба, периферическая часть— дегенерированная, омертвевшая и при посевах на питательные среды роста не дает. При окраске центральная часть окрашивается грампо-ложительно, а наружные разрастания измененного мицелия — грам-отрицательно. В препаратах из культур A. bovis видны разветвления одноклеточного тонкого несептированного мицелия диаметром 0,6...0,7 мкм. Мицелий окрашивается грамположительно.

Культивирование и культуральные свой­ства. A. bovis растет на средах плотных и жидких с добавлением сыворотки крови. Аэроб. Оптимальная температура роста 37 °С. Растет медленно— 1...2 нед. На плотных средах (сывороточный МПА, МПЖ) сначала появляются мелкие прозрачные колонии, приобретающие со временем беловато-серый цвет. По мере даль­нейшего роста колонии становятся сухими, плотными, с неровной поверхностью, врастающие в среды. При старении культуры коло­нии как бы посыпаны порошком мела. В жидкой среде (сыворо­точный МПБ) рост характеризуется образованием осадка в виде зернышек —это густое сплетение нитей мицелия. По мере старе­ния культуры на поверхности бульона появляется морщинистая пленка желтоватой окраски, среда остается прозрачной. Вырос­шую культуру используют для внутримышечного заражения крольчат, которых через З...4нед убивают и исследуют с целью диагностики актином икоза.

Тема 24. ПАТОГЕННЫЕ СПИРИЛЛЫ

Возбудитель кампилобактериоза. Это бактерии семейства Spirillaceae, рода Campylobacter. Основные виды: C.fetus (подвиды С. fetus venerealis и C.fetus sb.fetus), C.jejuni, С. sputorum (подвиды С. sputorum sputorum, С. sputorum bubulus, С sputorum faecalis) и непато­генный С. coli. C.fetus sb. fetus вызывает аборты у овец, крупного ро­гатого скота. C.fetus sb. veneralis — патогенен для крупного рогатого скота. C.jejuni вызывает аборты у овец, энтериты у телят, ягнят и других животных. С. mucosalis патогенен для свиней; выделяют при признаках некротического энтерита и локального илеита.

Бактериологическое исследование. Включа­ет в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культураль-но-морфологическим, ферментативным, серологическим свой­ствам.

В лабораторию направляют абортированный плод целиком с плодными оболочками или от крупных плодов голову, желудок, легкие, печень; у абортировавших животных — плаценту, слизь из шейки матки, взятую стерильно в первые З...4сут после аборта или в период охоты; от быков-производителей — препуциальную слизь и секрет придаточных половых желез; от убитых с диагнос­тической целью животных — матку, влагалище, лимфоузлы тазо­вой области.

Микроскопия. Представители рода Campyhbacter — грам-отрицательные полиморфные тонкие палочки, изогнутые в виде «крыла чайки», запятой, спирали с одним или несколькими завит­ками, или S-образные. Средние размеры (0,5...8) х (0,2...0,8) мкм. Подвижны за счет одного полярного жгутика на одном или обоих концах клетки; движение винтообразное. Спор и капсул не обра­зуют.

В мазках от животных, подвергавшихся лечению, располагают­ся в виде длинных спирилл, малоизвитых нитей и мелких кокко-видных форм.

Культурально-биохимические свойства. Возбудитель — микроаэрофил; температурный оптимум роста 37...38 "С. Для получения культуры кампилобактерий используют полужидкие и плотные питательные среды: плотный 2...3 %-й МППА и полужидкий 0,2 %-й мясопеченочный пептонный агар (ПЖА), среду Китта—Тароцци без масла, агар Мартена, сафрани-но-железо-новобиоциновую (СЖН) среду. Для обогащения в пита­тельные среды добавляют 5... 10 % дефибринированной крови круп­ного рогатого скота, овец, кроликов или сыворотку крови лошади. Культивируют в течение 6...10сут в микроаэрофильных условиях при замене 10...15% воздуха оксидом углерода. Контаминирован-ный материал высевают на среду СЖН: полужидкий агар — 0,5 мл, 2 %-й раствор сульфата железа — 5 мл, 0,5 %-й водный раствор саф­ранина Т —5 мл и 0,2%-й водный раствор новобиоцина — 5 мл. Среду фильтруют через бумажный фильтр, разливают в пробирки и автоклавируют 25 мин при 115 °С. Готовая к использованию среда должна быть розового цвета; рН 6,8. При культивировании на дан­ной среде кампилобактерий ее цвет не изменяется, другой микро­флоры — приобретает ярко-желтую окраску.

Каждую пробу высевают, растирая шпателем по поверхности среды, в нескольких чашках Петри. Выросшие колонии пересева­ют на полужидкий кровяной, сывороточный агар или среду Китта — Тароцци для получения чистой культуры.

При первичном выделении на плотной среде кампилобактерий образуют через 3...4 сут колонии (гладкие, бесцветные, диаметром мм или шероховатые, непрозрачные, белые или кремовые до мм в диаметре, или плоские, серые или светло-коричневые с не­ровными краями); редко в виде тонкого налета. На кровяном агаре гемолиз отсутствует. При росте на сывороточном бульоне дают
слабое помутнение, иногда с образованием незначительного рыхлого осадка. На полужидком агаре растут в виде серовато-голубого диска около поверхности среды.

У выделенных культур кампилобактерий изучают фермента­тивную активность, ростовые потребности и на основании полученных данных идентифицируют их на уровне вида, подвида, био­вара.

Серологическая идентификация. Для сероди­агностики кампилобактерий выпускают агглютинирующие и лю-минесцирующие сыворотки против. С. fetus subsp. fetus (первый тип), С. fetus subsp. venerealis (второй тип), С. spulorum subsp. bubulus (третий тип).

Для ориентировочной идентификации выделенных культур ставят РА на стекле, используя указанные сыворотки, разведен­ные 1:50.

Для окончательной серологической идентификации кампило­бактерий ставят пробирочную РА. Для этого готовят последова­тельные разведения каждой из трех моноспецифических сыворо­ток в 3 %-м растворе хлорида натрия, содержащем 0,3 % формали­на, — 1 :25, 1 :50, 1 : 100, ! : 200. Затем в каждую пробирку с ука­занными разведениями моноспецифических сывороток добавляют по 0,5 мл исследуемой суспензии вибрионов концент­рацией 1 -109. После внесения компонентов пробирки тшательно встряхивают и помещают в термостат (37 °С) до следующего дня. Затем их выдерживают 3...4 ч при комнатной температуре и учи­тывают результаты реакции.

При положительной реакции с моноспецифической сыворот­кой одного типа и отрицательной с моноспецифическими сыво­ротками остальных двух типов исследуемый штамм относят к тому типу, с которым получен положительный результат.

При получении положительной реакции с двумя моноспеци­фическими сыворотками (что может быть при выделении атипич­ных или диссоциированных штаммов) опыт повторяют с обеими моноспецифическими сыворотками, агглютинировавшими иссле­дуемую суспензию вибрионов, применяя более высокие разведе­ния, чтобы определить титр каждой сыворотки. Типовую принад­лежность исследуемого штамма устанавливают по той моноспеци­фической сыворотке, которая агглютинирует микробную суспен­зию в более высоком титре.

Для идентификации возбудителей кампилобактериоза в реак­ции иммунофлуоресценции используют как чистые, так и сме­шанные культуры, выращенные на общепринятых питательных средах.

Б и о и р о б а. Нативным материалом или выделенной культу­рой заражают беременных морских свинок внутрибрюшинно или во влагалище с последующим исследованием абортирован­ных плодов. Если в течение 10...12 сут аборт отсутствует, то мор­ских свинок убивают и исследуют содержимое полости матки и плоды. При необходимости биопробу ставят на беременных тел­ках и овцах, заражая их подкожно или перорально. Животные абортируют, а при отсутствии аборта их убивают с диагностичес­кой целью.

Серологическая диагностика. Основана у ко­ров на результатах реакции агглютинации с вагинальной слизью (РАВС), а у овец — РА с сывороткой крови.

Слизь берут марлевым тампоном, который помещают в про­бирку с 5 мл формалинизированного 3%-го раствора хлорида на­трия. Выдерживают 12...14 ч. Тампон отжимают, жидкость цент­рифугируют при 2500...3000 мин~' в течение 30 мин.

После центрифугирования реакцию ставят с экстрактом ваги­нальной слизи в четырех двукратных разведениях. Для приготов­ления кампилобактериозного антигена исходную концентриро­ванную суспензию бактерий разводят физиологическим раство­ром, содержащим 0,3 % формалина, в соотношении 1 : 10.