Гематологія і переливання крові (стр. 20 )

АА индуцировали субплантарным введением полного адъюванта Фрейнда, в дозе 0,05 мл/мышь, содержащей 1,5 мг/мл Micobacterium tuberculosis на 100 г массы животного. Степень отека оценивали по отношению диаметра опытного голеностопного сустава к интактному и выражали в виде индекса артрита.

Нативную или криоконсервированную СКП (нСКП и кСКП соответственно) вводили на 7-е сутки развития АА в дозе 5´106 клеток на мышь. Животные были разделены на группы по 7 мышей: 1 – с АА, 2 – введение животным с АА нСКП, 3- введение кКСП с 10% ДМСО (cуспензия КД), 4 – введение кКСП с 10% ПДС (суспензия КП), 6 –введение интактным животным ЗФР (контроль). Эффект лечения АА оценивали по индексу артрита и содержанию в КМ клеток с фенотипическими признаками стволовых кроветворных клеток (СКК), экспрессирующих маркеры CD34+CD38+ и CD117+, которые определяли с помощью МАТ фирмы ВD Pharmingen и Abcam по протоколам производителей на проточном цитофлуориметре FACS Calibur (Becton Dickinson, USA).

Результаты и обсуждение. После применения нативных и криоконсервированных в различных условиях СКП динамика снижения индекса артрита была различной (рис. 1). Его минимизация после введения нСКП была установлена на 14-е сутки, КД – на 28-е, КП – на 14-е и 28-е сутки развития АА.

Рис. 1. Индекс артрита до и после введения СКП

Примечание: * – достоверные отличия при сравнении исследуемой группы и группы животных с АА, р<0,05.

Неоднократно указывалось на нарушение при развитии АИЗ состояния гемопоэтической системы [2]. Действительно, в динамике развития АА установлено, что на фоне снижения в 1,2 раза в сравнении с контролем количества клеток на бедро (рис.2), повышалось содержание обеих субпопуляций компартмента СКК: на 14-е сутки – количество CD34+CD38- клеток – в 1,7 раза (рис.3) , CD117+ клеток – в 1,3 раза (рис.4), на 28-е сутки – в 3,8 раза и 3,6 раза соответственно. Таким образом, выраженность этого процесса была выше у более потентных CD34+CD38- клеток. Это согласуется с результатами [1] об увеличении в 2,4 раза количества более потентных КОЕс-12 в КМ животных с АА в этот же срок. Вероятно, недостаток в КМ более дифференцированных кроветворных предшественников по принципу обратной связи активирует процессы пролиферации более потентных клеток стволового компартмента.

Рис. 2. Содержание ядерных клеток в КМ при АА после введения СКП

Примечание: * – достоверные отличия при сравнении исследуемой группы с контрольной, р<0,05.

Рис. 3. Количество СД34+38- клеток, индекс пролиферативной активности (ИПА) в КМ у животных с АА до и после введения СКП

Примечание: здесь и далее см. рис. 2.

Для оценки выраженности проявления функционального потенциала СКК нами был использован индекс пролиферативной активности (ИПА) [2], определяемый как отношение процентного содержания менее дифференцированных СКК к более дифференцированным клеткам, то есть%СD34+CD38- /%CD117+. На фоне повышения содержания обеих субпопуляций СКК при АА выраженность этого процесса у более потентных СКК была выше, что подтверждалось и повышением ИПА – в 1,3 раза (14-е сут) и 1,1 раза (28-е сут) (рис. 5). Данный факт указывает на превалирование пролиферативного потенциала СКК животных с АА над дифференцировочным в эти сроки. На 28-е сутки показатель ИПА был ниже по сравнению с 14-и сутками, что может свидетельствовать о снижении темпов пролиферации и истощении пула клеток, что подтверждается снижением количества ядерных клеток в бедре (рис. 2).

Рис. 4. Количество СД117+ клеток в костном мозге животных с АА после применения клеток плаценты

 

Рис. 5. Индекс пролиферативной активности (ИПА) в КМ у животных с АА до и после введения СКП

На 14-е сутки терапевтическое действие СКП наблюдалось в группе с введением КП, при этом отмечалось повышение количества ядерных клеток в 1,2 раза, относительное содержание СD117+ клеток в 1,7 раза, однако ИПА оставался выше контроля. Отсутствие эффекта при введении КД на 14-е сутки в отличие от нСКП и КП возможно обусловлено разнонаправленным действием вводимых суспензий на СD117+ клетки. На 28-е сутки в группах с введением КД и КП наблюдали лечебный эффект, при этом оба препарата повышали количество ядерных клеток (в 1,7 раза и 1,9 раза соответственно). На этом фоне было установлено снижение ИПА (в 2,3 и 1,2 раза соответственно).

Представленные данные свидетельствуют о перераспределении субпопуляционного состава клеток стволового компартмента в гемопоэтическом плацдарме при АА и корригирующем влиянии на эти изменения клеток плаценты. Возможность регуляции состояния кроветворных предшественников у животных с АА введением СКП подтверждается наличием гемопоэзиндуцирующего потенциала этой ткани. Так, например, показано существование гемопоэтических кластеров в плаценте, определяемых по экспрессии маркеров СД31,СД34, Kit, формируемых из аллантоиса и регулируемых эндо­телиаль­ными клетками плаценты через SCF/Kit сигналирование [7].

Выводы: 1. В динамике развития АА (на 14-е и 28-е сутки) в условиях ингибиции медуллярного кроветворения в сравнении с контролем установлено повышение концентрации в костном мозге СD117+ и СD34+СD38- клеток, причем в большей степени у более потентных СКК.

2. Проявление лечебного эффекта в отношении гемопоэтической системы реципиентов с АА препаратами КД и КП (на 28-е сутки) обусловлено коррекцией под их влиянием пролиферативной активности клеток КМ, в частности, снижением содержания СD34+СD38- и ИПА.

3. Условия криоконсервирования СКП определяют различия в проявлении функциональной активности КД и КП (на 14-е сут.) и могут быть связаны с разнонаправленной регуляцией содержания CD117+ клеток в КМ.

Литература

1. Ответ лимфогемопоэтической системы организма на
введение про­дуктов фетоплацентарного комплекса / , , [и др.] // Проблемы криобиологии. – 2000. – № 2. – С. 15–30.

2. Состояние стволового гемопоэтического компартмента на разных этапах развития адъювантного артрита / , , [и др.] // Світ медицини та біології. – 2009. – № 2. – С. 73–80.

3. Гривцова трансплантируемых стволовых кроветворных клеток / , // Современная онкология. – 2006. – Т. 8, № 1. – С. 1–16.

4. Приготування, зберігання та клінічне використання кріоконсервованої суспензії плаценти: метод. рекоменд. / наук. ред. В. І. Грищенко [та ін.]. – Харків. –1997. – 10 с.

5. Cardozo A. A. Release from quiescence of CD34+CD38- human umbilical cord blood cells reveals their potentiality to engraft adults / A. A. Cardozo, Li Ma-Lin, P. Batard // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. – 1993. – V. 90. – Р. 8707–8711.

6. A stem cell molecular signature / N. B. Ivanova, J. T. Dimos, C. Schaniel [et al.] // Science. – 2002. – Vol. 298 – P. 601–604.

7. A Regulation of hematopoietic cell clusters in the placental niche through SCF / Kit signaling in embryonic mouse / T. Sasaki, C. Mizuochi, Horio Yuka [et al.] // Development. – 2011. – 137 – P. 3941–3952.

8. Kit Regulates Maintenance of Quiescent Hematopoietic Stem Cells / L. A. Thorén, K. Liuba, D. Bryder, J. M. Nygren // The Journal of Immunology – 2008. – 180. – P. 2045–2053.

УДК 616.155.392+612.017:616.097

ХАРАКТЕРИСТИКА АУТОИММУННОГО ПРОЦЕССА У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКОЙ МИЕЛОИДНОЙ ЛЕЙКЕМИЕЙ

Ал. И. Гордиенко1, Ан. И. Гордиенко2

1ГУ «Институт гематологи и трансфузиологии НАМН Украины», Киев

2ГУ «Крымский государственный университет
им. »,

г. Симферополь

Резюме. У больных хронической миелоидной лейкемией в фазе акселерации до начала лечения впервые выявлена обратная корреляционная зависимость между низким содержанием CD4+CD25+- (Treg) лимфоцитов, которые контролируют иммуно­логическую толерантность организма, и повышенным уровнем в сыворотке крови аутоантител к нативной двунитевой ДНК (dsДНК).

Ключевые слова: хроническая миелоидная лейкемия, CD4+CD25+- (Treg-) лимфоциты, аутоантитела к нативной двунитевой ДНК (dsДНК).

Характеристика автоімунного процесу у хворих на хронічну мієлоїдну лейкемію

Ал. І. Гордієнко1, Ан. І. Гордієнко2

1ДУ «Інститут гематології та трансфузіології НАМН України», Київ

2ДУ «Кримський державний університет ім. С. І. Георгієвського», Сімферополь

Резюме. У хворих на хронічну мієлоїдну лейкемію в фазі акселерації до початку лікування вперше виявлена зворотна кореляційна залежність між низьким вмістом CD4+CD25+- (Treg) лімфоцитів, які контролюють імунологічну толерантність організму, та підвищеним рівнем усироватці крові автоантитіл до нативної двониткової ДНК (dsДНК).

Ключові слова: хронічна мієлоїдна лейкемія, CD4+CD25+- (Treg-) лімфоцити, автоантитіла до нативної двониткової ДНК (dsДНК).

The characteristic autoimmune process in patients with chronic myeloid leukaemia

Al. Gordienko1, Аn. Gordienko2

1SI «Institute Haemotology and Transfusiology of NAMS of Ukraine», Kyiv

2 SI «Crimean State university S. I. Georgievskogo», Simferopol

Summary. In patients with chronic myeloid leukemia in a phase of an acceleration prior to the beginning of treatment for the first time reveals return correlation dependence between low maintenance CD4+CD25+-(Treg) lymphocytes which supervise immunology tolerance of an organism, and the increased level in serum of blood autoantibody to native double string DNA (dsDNA).