Гематологія і переливання крові (стр. 7 )

Як свідчать результати дослідження, при додаванні ВАО у концентрації N до суспензії ЯВК ПК (ІІ група зразків) після внесення розчину ДМСО не відбувається активації процесів ПОЛ, що підтверджує вірогідне зниження в зразках після відтаювання концентрації ІПЗ – (0,570±0,009) E/мл; ДК – (0,175±0,006) E/мл; ТК – (0,032±0,002) E/мл; ОДК – (0,028±0,002) E/мл – при пероксидації нейтральних ліпідів та ДК – на (1,190±0,106) E/мл – фосфоліпідів. При збільшенні концентрації ВАО у 2 рази вірогідних розбіжностей у показниках ПОЛ під час проведення повного циклу заморожування – відтаювання не відмічено, що є також позитивним фактом. Порівняно з І групою зразків ПК у присутності ВАО в обох концентраціях знижується вміст ШО, на що вказує достовірна різниця показників до та після заморожування: без ВАО – (0,004±0,001) E/мл та при його додаванні – (0,001±0,0004) E/мл. Отримані дані свідчать про позитивний вплив антиоксиданту щодо збільшення стабільності клітинних мембран.

У наступній серії дослідів вивчали вплив двох концентрацій ВАО (N і 2N) при чотирьох варіантах терміну експозиції (5, 10, 15 та 30 хв) до моменту введення у суспензію ЯВК ПК розчину кріопротектора. Встановлено позитивний ефект дії антиоксиданту на процеси ПОЛ за всіма досліджуваними параметрами. При цьому найбільшому зниженню активності процесів перекисного окислення як нейтральних ліпідів, так і фосфоліпідів у зразках після розморожування сприяє варіант концентрації 2N з терміном експозиції у 10 хв (табл.)

Таблиця

Вплив комплексу вітамінів-антиоксидантів групи «В» на показники ПОЛ у зразках ЯВК ПК на етапах процесу кріоконсервування (експозиція з антиоксидантом – 10 хв), М±m

ПОЛ:	Групи зразків:
І група	ІІ-А група	ІІ-В група
M±m	∆ a-b	M±m	∆ a-b	M±m	∆ a-b
Нейтральні ліпіди, Е/мл	ІПЗ	a	0,890±0,104	0,205*	1,010±0,177	0,122	1,364±0,278	0,356*
b	1,095±0,109	1,132±0,173	1,008±0,181
ДК	a	0,222±0,029	0,175*	0,277±0,057	0,090*	0,461±0,114	0,170*
b	0,397±0,056	0,367±0,127	0,291±0,054
ТК	a	0,043±0,006	0,052*	0,058±0,014	0,025*	0,103±0,027	0,043*
b	0,095±0,015	0,083±0,035	0,060±0,014
ОДК	a	0,043±0,006	0,049*	0,055±0,013	0,024*	0,099±0,025	0,040*
b	0,092±0,015	0,079±0,031	0,059±0,013
ШО	a	0,012±0,001	0,004*	0,014±0,002	0,001*	0,018±0,004	0,004*
b	0,016±0,002	0,013±0,002	0,014±0,005
фосфоліпіди, Е/мл	ІПЗ	a	5,575±0,511	0,987*	6,467±1,105	0,325	7,666±1,371	0,589
b	6,562±0,612	6,792±1,066	7,077±1,213
ДК	a	1,820±0,202	0,225*	2,159±0,311	0,156	3,047±0,472	0,273
b	2,045±0,195	2,315±0,339	2,774±0,459
ТК	a	0,195±0,022	0,067*	0,578±0,175	0,079	1,173±0,466	0,034
b	0,262±0,029	0,657±0,180	1,207±0,476
ОДК	a	0,148±0,016	0,057*	0,478±0,154	0,069	1,009±0,415	0,024
b	0,205±0,023	0,547±0,159	1,033±0,424
ШО	a	0,045±0,006	0,024*	0,042±0,008	0,012*	0,069±0,018	0,004
b	0,069±0,010	0,054±0,015	0,073±0,023

Примітки: 1. ∆ – різниця показників до (a) – і після розморожування (b);

2. p*– вірогідна різниця показників;

3. ІІ–А група – концентрація ВАО дорівнює N;

4. II–В група – концентрація ВАО дорівнює 2N.

У разі підвищення концентрації ВАО до 3N (1,2 мкл/мл) і 4N (1,6 мкл/мл) при пероксидації фосфоліпідів спостерігається статистично достовірне зростання показника ШО відповідно в 1,7 та 2 рази, що свідчить про порушення механізму шифоутворення. Також при концентрації антиоксиданта 4N в розморожених зразках ПК відбувається достовірна активація процесів перекисного окислення нейтральних ліпідів, але рівень її є значно нижчий, ніж у зразках І групи.

Таким чином, результатами дослідження доведено, що найбільше зниження концентрації продуктів перекисного окислення як нейтральних ліпідів, так і фосфоліпідів після розморожування в зразках ПК відбувається при застосуванні ВАО у концентрації 2N за 10 хв до початку експозиції з кріопротектором ДМСО. Це співпадає з результатами вивчення впливу дослідженого антиоксиданту на збереженість ЯВК ПК, у тому числі і клітин–попередників гемопоезу, в процесі кріоконсервування зазначеним способом [9, 10]. Можна припустити, що позитивний вплив ВАО на процеси ПОЛ пов’язаний з тим, що дія речовин з антиоксидантними властивостями спрямована як на ефективну елімінацію первинних АФК, так і на утилізацію жирнокислотних і ліпідних гідроперекисів, у тому числі, через механізм шифоутворення.

Висновки: 1. Встановлено, що найбільшому зниженню показників ПОЛ при проведенні повного циклу заморожування – відтаювання способом ДУ «ІГТ НАМН» сприяє експозиція ЯВК ПК при підготовці до кріоконсервування з комплексом вітамінів – антиоксидантів групи «В» у концентрації 2N (0,8 мкл/мл кінцевого об’єму суспензії клітин) за 10 хв до внесення розчину кріопротектора.

2. Доведено правомірність використання показників ПОЛ як додаткових критеріїв оцінки функціональної повноцінності клітин у процесі кріоконсервування.

Література

1.  Горожанская окисление и механизмы антиоксидантной защиты в нормальной клетке и при опухолевых заболеваниях (лекция) / // Клиническая лабораторная диагностика. – 2010. – № 6. – С. 28–44.

2.  Аношина процесів перекисного окислення ліпідів у зразках пуповинної крові на етапах кріоконсервування / , // Гематологія і переливання крові: міжвідомчий збірник. – К.: Атіка-Н, 2010. – Вип. 35. – С. 139–147.

3.  Михайлова состояния антиоксидантной системы ядросодержащих клеток кордовой крови до и после криоконсервирования / , Бабийчук, ,
// Актуальні питання гематології та трансфузіології: матеріали науково-практичної конференції за участю міжнародних спеціалістів, присвяченої 75-річчю ДУ «Інститут гематології та трансфузіології НАМН України» (м. Київ, 27–28 жовтня 2011 р.). – К.: Атіка-Н, 2011. – С. 100–101.

4.  Зв’язок показників окисно-відновлювального метаболізму та якості ядровмісних клітин пуповинної крові під час кріоконсервування / , , [та ін.] // Український журнал гематології та трансфузіології. – 2011. – № 4. – С. 22–55.

5.  О возможности использования показателей перекисного окисления липидов для оценки эффективности низкотемпературного хранения пуповинной крови / , , [и др.] // Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии: тезисы Всероссийской научно-практической конференции (г. Санкт-Петербург, 5–7 июля 2011 г.). – Трансфузиология. – 2011. – Том 12. – № 2. – С. 92–93.

6.  Paulson K. The role of allogeneic stem cell transplantation for adult acute lymphoblastic leukemia / K. Paulson, D. Szwajcer, M. D. Seftel // Transfusion and Apheresis Science. – 2011. – Vol. 44. – № 2. – P. 197–203.

7.  Пат. № 000 UA МПК А01N 1/02 A 61K 35/14. Спосіб кріоконсервування ядровмісних клітин пуповинної/плацентарної крові / , , (UA); заявник і патентовласник ДУ «ІГТ АМНУ» (UA). – № u 201006071, заявл. 19.05.2010; опубл. 10.02.2011, Бюл. № 3.

8.  Оцінка перекисного окислення ліпідів у зразках кріоконсервованої пуповинної крові / , , // Український журнал гематології та трансфузіології. – 2011. – № 3. – С. 12–15.

9.  Вітаміни-антиоксиданти: вплив на функціональну активність клітин попередників гемопоезу кріоконсервованої пуповинної крові в культурі тканини / , , [та ін.] // Збірник наукових праць співробітників НМАПО імені
. – 2011. – Вип. 20, книга 3. – С. 617–621.

10.  Антиоксидантний захист кріоконсервованих ядровмісних клітин пуповинної крові / , , [та ін.] // Актуальні питання гематології та трансфузіології: матеріали науково-практичної конференції за участю міжнародних спеціалістів, присвяченої 75-річчю ДУ «Інститут гематології та трансфузіології НАМН України» (м. Київ, 27–28 жовтня 2011 р.). – К.: Атіка-Н, 2011. – С.115–117.